Chip-seq實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)圖版
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是Chip-seq實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)圖版
ChIP-seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的高通量測(cè)序技術(shù)。而普拉特澤生物——分子檢測(cè)平臺(tái)也非常重視這一點(diǎn),為廣大科研人員提供Chip實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),同時(shí)也繪制了各種chip實(shí)驗(yàn)流程圖片,分享給大家一起共勉!
聲明:以下圖片繪制均來(lái)源網(wǎng)絡(luò)~ChIP-seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)它通常用于研究轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白修飾、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)等與基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)的生物學(xué)問(wèn)題。
ChIP-seq的基本原理是:利用特定的抗體將感興趣的蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的復(fù)合物進(jìn)行免疫共沉淀,然后通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)免疫共沉淀的DNA進(jìn)行測(cè)序和分析,以確定蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的位置和數(shù)量。
具體步驟如下:
1.利用甲醛固定蛋白質(zhì)和DNA
將細(xì)胞或組織樣品與甲醛等交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián),使得蛋白質(zhì)與DNA之間形成穩(wěn)定的交聯(lián)復(fù)合物。
2.利用超聲波/限制性酶切割DNA
將交聯(lián)后的細(xì)胞或組織樣品進(jìn)行裂解,使得蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物被釋放出來(lái)。
3.免疫共沉淀
使用特定的抗體對(duì)感興趣的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫共沉淀,將與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA片段一同沉淀下來(lái)。
4.反交聯(lián)
將免疫共沉淀的樣品進(jìn)行反交聯(lián),使得蛋白質(zhì)與DNA之間的交聯(lián)斷開(kāi),同時(shí)將DNA片段從蛋白質(zhì)中解離出來(lái)。
5.DNA純化
將反交聯(lián)后的DNA進(jìn)行純化和富集,去除雜質(zhì)和不需要的DNA片段。
6.文庫(kù)構(gòu)建
將純化后的DNA片段進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建,包括DNA片段的修飾、適配體的連接、PCR擴(kuò)增等步驟。
7.高通量測(cè)序
對(duì)構(gòu)建好的文庫(kù)進(jìn)行高通量測(cè)序,得到大量的短讀序列。
8.數(shù)據(jù)分析
對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析,包括數(shù)據(jù)分析對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析、序列比對(duì)、峰值識(shí)別、富集分析、差異分析等步驟,以及它們?cè)诨虮磉_(dá)調(diào)控中的功能和機(jī)制。
All in all,chip-seq技術(shù)的原理是通過(guò)免疫共沉淀和高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的復(fù)合物進(jìn)行定位和分析,從而揭示基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制和生物學(xué)意義。
這是一項(xiàng)超適合轉(zhuǎn)錄因子研究的技術(shù)?。?!
好,今天關(guān)于Chip-seq實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)圖
就說(shuō)到這里
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