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Question：很多人WB結(jié)果不好，卻沒懷疑過自己的膠選錯(cuò)了（普拉特澤生物提供長期穩(wěn)定的wb實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)）

把聚丙烯酰胺凝膠想象成一個(gè)分子篩網(wǎng)：

1）高濃度膠（如15%）：網(wǎng)眼小，小蛋白能靈活穿梭，大蛋白則寸步難行

2）低濃度膠（如8%）：網(wǎng)眼大，大蛋白可以自由奔馳，小蛋白卻可能“剎不住車”

選錯(cuò)濃度會(huì)怎樣？

1）膠太濃：大蛋白分離不開，擠成一團(tuán)

2）膠太稀：小蛋白跑得太快，直接“跑丟”

二、到底應(yīng)該怎么選擇濃度膠呢?

2）大蛋白用低濃度：更容易分離且轉(zhuǎn)膜更充分

3）梯度膠是神器：從上到下濃度遞增，一塊膠搞定不同大小蛋白

1）應(yīng)對(duì)超大或超小分子量蛋白

對(duì)于大于200 kDa的蛋白，比如200 kDa或280 kDa的蛋白，推薦使用6%或7% 的分離膠，并適當(dāng)延長電泳時(shí)間。

對(duì)于小于20 kDa的小分子蛋白或多肽，常規(guī)的Tris-甘氨酸系統(tǒng)分離效果可能不佳。這時(shí)，Tris-Tricine緩沖系統(tǒng)的預(yù)制膠（例如16.5% 的濃度）是更好的選擇，它能更有效地分離2-40 kDa的小分子量蛋白。

2）使用梯度膠應(yīng)對(duì)寬范圍或不同大小的蛋白
如果需要分離的蛋白分子量分布很廣，或者想在同一塊膠上同時(shí)分析多個(gè)不同大小的蛋白，梯度膠（例如4-12% , 4-20% ）會(huì)非常方便。它從膠頂?shù)侥z底的濃度是連續(xù)變化的，因此可以在同一塊膠上清晰地分離出分子量差異很大的蛋白。

三、經(jīng)驗(yàn)

?? 這是快要結(jié)束的時(shí)候

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