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   細胞凋亡檢測實驗操作過程中的常見問題及解決方法由普拉特澤生物給大家解答與分享，普拉特澤生物流式檢測平臺可承接各種流式檢測外包服務(wù)，包括檢測細胞凋亡、細胞增殖、細胞周期等實驗外包服務(wù)，本文是我們在承接數(shù)百例細胞凋亡檢測實驗中，對操作過程中的常見問題與大家留言咨詢最多的問題進行回答與建議，快來收藏吧！

   Question 1：用流式檢測細胞凋亡和用Tunel染色檢測細胞凋亡，為什么細胞的凋亡率不一樣？Tunel測出來的死亡率特別高，怎么破？

   A：客觀來說，用不同的試驗方法來檢測細胞凋亡哪怕是同一批樣本、同一個人操作也可能會因為時間溫度、樣本污染、操作不當(dāng)?shù)葐栴}造成結(jié)果上相應(yīng)的偏差，但是不會太大。Tunel染色檢測的是凋亡最晚期的DNA片段化，而且在Tunel檢測過程中，把操作損傷的細胞和壞死的細胞也當(dāng)做了凋亡細胞，如果最后的結(jié)果數(shù)據(jù)是用的肉眼來看的話也會有經(jīng)驗判斷上的誤差，所以Tunel檢測細胞凋亡時凋亡率高一點是正常的。這兩種方法結(jié)果不同的造成原因?qū)嵲谑怯刑嗟牟淮_定性了，如果你也是有相同的問題，可以給客服留言將詳細的實驗過程描述出來，方便技術(shù)人員回復(fù)~

   Question 2：收集準(zhǔn)備檢測細胞凋亡的樣本時，貼壁細胞做流式前用細胞刮好還是用胰酶消化下來比較好？

   A：胰酶對細胞的傷害確實挺大的胰酶屬于異種蛋白酶，可以將細胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合的蛋白質(zhì)降解，對細胞也有傷害，我們實驗室對不同的細胞有不同的消化方式，貼壁細胞也有多種，區(qū)別對待所以不同的細胞樣本有不同的取樣方法，如果是貼壁能力很強的細胞胰酶也很難消化下來，還是用細胞刮比較好，正常操作就細胞不會損傷很多。

   Question 3：冷凍保存后的組織切塊再做流式會不會對結(jié)果有什么影響？

   A：會，而且影響很大。流式細胞儀檢測細胞需要細胞活性好、單個分散，這樣才方便實驗過程中區(qū)分死亡、凋亡和正常細胞，組織在凍存、解凍后會有大量細胞死亡、細胞活性下降、粘連破碎等問題，無法再上機檢測。流式檢測最好是用新鮮的剛?cè)〔牡臉颖具M行檢測，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，操作方便。

   Question 4：用Tunel測細胞樣本時熒光信號弱或者沒有熒光信號，是染色沒染上嗎？

   A：不一定，如果確定細胞或組織是出處于凋亡的狀態(tài)，我們要注意的是：操作時樣本切片切得薄一點，方便染色；脫蠟和水化時如果不充分也會影響染色液上色；切片不新鮮也會影響染色效率，和做流式檢測一樣盡量選擇新鮮的切片；熒光易碎滅，所以操作時要觀察快速且避光。

   Question5：用的Tunel染色檢測細胞凋亡時熒光的背景很強，怎么解決呢？

   A：熒光背景過強影響結(jié)果的觀察的話可能是因為Tunel染色的時間過長或染色液濃度太高，適當(dāng)?shù)慕档突驕p少濃度和染色時間一般會有所緩解。如果沒有緩解的話可以適當(dāng)調(diào)整曝光的條件，將陰性對照組地背景光調(diào)到無，然后用這個曝光的條件去拍攝實驗組。
   好啦，那么關(guān)于細胞凋亡檢測的詳細實驗步驟、實驗注意事項以及操作過程中的常見問題和解決方法我們就全部介紹完了，不記得的同學(xué)鏈接奉上，記得要溫故而知新哦。

《流式檢測細胞凋亡實驗原理與步驟》

《流式檢測細胞凋亡操作注意事項》

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