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  細胞增殖與細胞活性檢測

—— 四大法寶MTT&CCK8&MTS&EdU

小編在大量的客戶接洽過程中，發(fā)現(xiàn)很多客戶爸爸經(jīng)?；煜毎鲋郴蚣毎钚赃@兩個概念。其實應為..確實挺容易混淆的哈哈哈哈哈！

因為檢測手段和檢測原理十分相近，所以經(jīng)常被忽略二者概念上的區(qū)別。但是！我們還是要知道細胞增殖能力，以及細胞活性的區(qū)別，才能更好的利用實驗方法去達到檢測目的不是嘛。

我們先了解一下細胞增殖和細胞活性這兩個基本概念：

細胞增殖是活細胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征 ，是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎。細胞增殖是指細胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA復制等反應，完成細胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中的細胞數(shù)量的變化，進而反應細胞的生長狀態(tài)及活性，細胞增殖檢測主要分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。

細胞活性是判斷體外培養(yǎng)細胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標，如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細胞活性檢測指標通常包括細胞膜對核酸染料的通透性、代謝活性、膜電位等。

細胞活性的檢測相當于細胞增殖能力的測定，采用特殊的試劑測定細胞的代謝活力或細胞代謝產(chǎn)物，通過檢測細胞的氧化還原活性反映細胞增殖能力，屬于間接檢測細胞增殖能力的方法。

細胞增殖的研究方法有很多，主要包括:MTT、MTS、CCK8、Edu等，其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。

今天，主要想給大家介紹一下MTT、CCK8和MTS。

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MTT：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

CCK8：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy?PMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。

MTS：是一種在MTT基礎上的改良試劑，含有一個新型的四唑化合物和一種電子偶聯(lián)劑（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ?。澹簦瑁铮螅?/span>一種有色的甲臜產(chǎn)物，可直接溶解于培養(yǎng)基中。這種轉(zhuǎn)化是在代謝活躍的細胞中的脫氫酶產(chǎn)生的NADPH或NADH的作ｌｆａｔｅ，PES），PES具有增強的化學穩(wěn)定性，這使它可與MTS混合形成穩(wěn)定的溶液。MTS被細胞生物還原成為用下完成的。在490 nm處檢測到的甲臜產(chǎn)物的量與培養(yǎng)中的活細胞數(shù)成正比。

為了讓大家更直觀的了解到這三種檢測方法的聯(lián)系與區(qū)別，我們采用了列表的方法：

除了這三種最常見的檢測方法以外，還想給大家介紹一下最新的細胞增殖檢測方法——EdU檢測方法。

EdU：是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能準確地反映細胞的增殖情況。EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU檢測染料在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在體外細胞和體內(nèi)組織水平能更準確地反映細胞增殖等現(xiàn)象。

當您根據(jù)具體的實驗情況選擇了合適的檢測方法的時候，發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果還是不理想，問題出在哪呢？

下面小編為您整理了以下實驗操作注意事項，希望能對您有所幫助：

1 、鋪板

細胞數(shù)量：在前期細胞培養(yǎng)中，觀察細胞貼壁率、貼壁后面積大小倍增時間；以確保處理過程中不會細胞過滿（鋪板太密或長太久，細胞都會擠死掉的?。瑴蚀_呈現(xiàn)處理因素與細胞數(shù)的關(guān)系（5×103 ~10×103 ）。意思就是先了解下你需要檢測的細胞，做個預實驗先。

2、避免血清的干擾

用含胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時，高濃度血清物質(zhì)（我也會吸光噠?。绊懺囼灴椎奈舛戎?，降低實驗敏感度。

3、防止邊緣效應及復孔設置

應在96孔板邊緣滴加PBS（別省那點板子?。。?，邊緣孔的水分揮發(fā)較快，藥物易被濃縮，對實驗影響很大。復孔，做3-5個，推薦5個（別省那點板子?。。?。