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有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題，他之前用ELISA 檢測細胞因子的話，發(fā)現(xiàn)樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎么辦呢，那么接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優(yōu)缺點，供各位大大們閱讀參考啦~

細胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經(jīng)刺激而合成（一般是免疫細胞）、分泌的一類生物活性物質(zhì)分泌的蛋白質(zhì)，在體內(nèi)廣泛參與免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)、刺激造血系統(tǒng)、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動，在抵抗外來病原及維持機體內(nèi)環(huán)境平衡中均起重要作用。

細胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內(nèi)分泌作用。

細胞因子的作用特點：多效性、重疊性、協(xié)同性、拮抗性和雙重性。

根據(jù)產(chǎn)生細胞因子的細胞種類不同分類：白細胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長因子（growth factor,GF）等。

細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學（重點介紹）

1、生物學測定法 其原理是根據(jù)細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據(jù)某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應(yīng)或?qū)Σ《镜囊种谱饔眠M行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。

2、分子生物學測定法 目前采用的技術(shù)有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內(nèi)細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。

3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用于細胞因子的檢測。

細胞因子的檢測方法對比

1、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）

原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化頻率很高，故可放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

優(yōu)點：避免特異性抗體直接標記，便宜。

缺點：所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯(lián)反應(yīng)所致的人工假象

2、流式細胞儀（CBA）

原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒——待測物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。

優(yōu)點：所需樣本量少、快速（實驗6-8h可以完成）操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好、高效（同一個樣品可以同時檢測多個因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測保留細胞及生化微環(huán)境更準確反應(yīng)了體內(nèi)狀況）。

缺點：價格略貴

3、免疫印跡法（WB）

原理：是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標蛋白與特有性一抗結(jié)合，再與辣根過氧化物酶（HRP）標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標蛋白在樣本中的表達情況

優(yōu)點：高特異性、高敏感性

缺點：細胞因子分析量較小，用WB進行檢測有些不合適

附兩張流式檢測的圖：