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  細胞周期，是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。細胞間期又分為C0期、G1期、S期、G2期；細胞分裂期即M期。

G0/G1期：G1期，細胞體積逐漸增大，細胞開始RNA和蛋白質(zhì)的合成，DNA含量保持二倍體狀態(tài)，G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下，又可進入周期，從DNA含量上無法區(qū)分G0與G1期；

S期：在這一階段完成DNA的合成以及合成與DNA組裝構(gòu)成染色質(zhì)等有關(guān)的組蛋白。DNA含量在此時期增加，介于G1期和G2期之間；

G2/M期：G2期是DNA復(fù)制結(jié)束和開始有絲分裂之間的間隙。從DNA含量上同樣無法區(qū)分G2期和M期。

檢測細胞周期最常用的方法就是檢測細胞DNA含量，正常生長的細胞都會經(jīng)歷分裂過程，G0/G1期是兩倍體時期，S期DNA開始合成，到G2/M期，細胞處于四倍體時期，之后細胞一分為二，進入下一個細胞周期。

碘化丙啶(Propidium ，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。

1、離心收集細胞，棄上清，用預(yù)冷的PBS洗滌2次；

2、細胞固定：用殘留的少許PBS混勻沉淀，緩慢加入-20℃預(yù)冷的70%乙醇，邊加邊搖勻，避免細胞粘連在一起，置于-20℃冰箱固定4h以上；

3、細胞染色：350g離心5 min，棄上清，用2mL的PBS洗滌2次，按照10^6 cells 加入500μLPBS，含50μg/mL的PI，100μg/mL的RNaseA，4°C避光孵育15 min-30 min（可將PI直接用PBS配成工作濃度，RNaseA現(xiàn)加進去）；

4、上機分析：由于PI具有很強的粘附性，容易使細胞聚團，建議過濾后再上機分析，同時別忘了檢查流式儀器的狀態(tài)，一般低速收集2-3萬個細胞即可。

1、縱坐標Cell Number：即計數(shù)的有效細胞數(shù)；

2、橫坐標DNA Content：即DNA含量；

3、常用的流式細胞術(shù)分析細胞周期的方法是依據(jù)細胞DNA含量（橫坐標）來分析的；

4、G0/G1期：DNA復(fù)制還沒開始，也是DNA含量最少的，即流式檢測結(jié)果圖的第一個峰；

5、S期：DNA開始復(fù)制，到完成復(fù)制，是一個一倍DNA到二倍DNA的過程，在流式結(jié)果圖中顯示期跨度特別大（第二個不高但很寬的峰）；

6、G2期：DNA復(fù)制完成至分裂的一段時間，此時細胞內(nèi)含二倍DNA，在流式結(jié)果圖中的第三個峰；

7、M期：細胞分裂過程，此時細胞內(nèi)也是二倍DNA，用DNA含量的方法是無法與G2期分開。

8、右側(cè)數(shù)字含義：Dip G1-58.65% at 50.38%，即G1期DNA含量平均值為58.65%；G1期細胞數(shù)占總數(shù)的50.38%，以此類推。

1、PI既能與DNA結(jié)合，又能與RNA結(jié)合，所以要用RNase消化RNA；

2、進樣速度：進樣速度為低速。若峰形較寬，可能就是進樣速度太快；

3、儀器質(zhì)控定期做，盡可能排除因機器設(shè)置引起的峰形加寬；

4、排除粘連細胞（FL2-A/FL2-W），最大程度的減少粘連細胞帶來的假陽性結(jié)果。

流式結(jié)果分析與注意事項點此跳轉(zhuǎn)