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免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

其原理就是將免疫學(xué)方法（抗原抗體特異性結(jié)合）與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布。熒光素受激發(fā)光的照射可以在顯微鏡下檢出明亮的熒光，成像后可利用定量技術(shù)測定含量，從而對抗原進行細(xì)胞定性和定位分析。

有關(guān)免疫熒光的應(yīng)用，列舉了以下幾項：

1、病原體檢測；

2、自身抗體檢測；

3、檢測組織中免疫球蛋白、補體、抗原抗體復(fù)合物；鑒定腫瘤組織中的腫瘤相關(guān)抗原；

4、細(xì)胞表面抗原與受體檢測：可用于淋巴細(xì)胞表面CD抗原、抗原受體、補體受體等的檢測以及淋巴細(xì)胞及其亞群的鑒定和計數(shù)；

5、將游離細(xì)胞作熒光抗體特異性染色后進行流式分析等。

實驗雖小但需要注意的點很多，碰到問題的時候難免需要一一排查原因保證實驗結(jié)果的嚴(yán)謹(jǐn)性，下面列舉了一些常見的問題同各位分享~

常見問題一：無/弱染色

1、可能原因是烤片溫度過高，推薦56℃-60℃ 1-2h；

2、檢查一下一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低，孵育是否時間過短等。

常見問題二：非特異性背景染色

1、檢查是否已滅活內(nèi)源性過氧化物酶；

2、在孵育過程中干片；

3、抗原熱修復(fù)過度。

常見問題三：染色過深

1、一抗?jié)舛冗^高；

2、染色試劑濃度過高或孵育時間過長。

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免疫熒光IF染色實驗步驟與結(jié)果解析點此跳轉(zhuǎn)

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