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 大家好！今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)一個新的實驗，DNA pull-dwon實驗，實驗介紹由普拉特澤生物分子檢測平臺總結(jié)分享，分子檢測平臺專業(yè)承接DNA pull-down實驗外包，為廣大生物科研路上的研究人提供實驗上的幫助。

  DNA Pull down實驗是用脫硫生物素標(biāo)記特異性DNA探針，脫硫生物素探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結(jié)合。提取物與磁珠-DNA探針孵育，作用蛋白質(zhì)分子可以和DNA探針特異性結(jié)合；經(jīng)過洗滌可以將非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)去除；用 Western Blot或質(zhì)譜對產(chǎn)物進(jìn)行檢測分析。

        一、實驗流程

         一般來說，該實驗首先，需要針對待研究目的基因的調(diào)控區(qū)域設(shè)計并制備特異性探針（以脫硫生物素標(biāo)記為主流）；同時，制備細(xì)胞核提取物；將探針和核提取物共同孵育，DNA結(jié)合蛋白就會和靶向序列特異性結(jié)合；然后，通過親和素磁珠純化蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物；最后針對獲得的蛋白，使用Western blot驗證或者質(zhì)譜方式鑒定蛋白質(zhì)類型。

       二、 DNA pull-down技術(shù)應(yīng)用

        DNA pull-down以感興趣的DNA序列為探針，尋找與該序列結(jié)合的蛋白質(zhì)，最常見的應(yīng)用是尋找某特定基因啟動子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子。

        a. DNA Pull down WB，用于檢測目標(biāo)DNA序列與某樣本中的待測蛋白是否存在相互作用；

        b. DNA Pull down MS，用于篩選目標(biāo)DNA序列與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。

        三、RNA pulldown優(yōu)缺點：

        ①　富集分析低豐度蛋白；

        ②　探針制備簡便，周期短；

        ③　獲得特異性蛋白與下游蛋白質(zhì)檢測技術(shù)兼容；

        缺點：

        ①　長連探針往往存在非特異結(jié)合現(xiàn)象；

        ②　反應(yīng)條件要求無核酸酶；

        ③　體外實驗，相對體內(nèi)實驗存在一定弊端；

        四、RNA pulldown實驗步驟

        1.探針設(shè)計及標(biāo)記

   2.樣本前處理

   3. Pull down

   4.蛋白質(zhì)檢測-- Western blot

   5.蛋白質(zhì)檢測-- MS

   好啦，DNA pull-down實驗就簡單介紹到這里啦，結(jié)尾給大家簡單介紹了一下實驗的框架流程，下期根據(jù)這個流程給大家詳細(xì)分享DNA pull-down實驗的詳細(xì)步驟，如果您也對DNA pull-down實驗感興趣或有DNA pull-down外包的需求，歡迎選擇咱們普拉特澤生物！下期見~