EMSA測定需要多少量的蛋白標(biāo)記的探針?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
在EMSA實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常會遇見各種各樣的實(shí)驗(yàn)問題,現(xiàn)在普拉特澤實(shí)驗(yàn)室要為大家解答之前提出的經(jīng)常會遇見的問題,其中之一那就是在EMSA測定需要多少量的蛋白標(biāo)記的探針?現(xiàn)在我們就來看看吧~
EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay)實(shí)驗(yàn)中所需的蛋白標(biāo)記探針量可以根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠非闆r而定,需要考慮以下因素:
1. 核酸探針大小:一般來說,小于100 bp的核酸片段需要更少的蛋白;大于500 bp的核酸片段可能需要較多的蛋白。
2. 蛋白質(zhì)性質(zhì)和濃度:一些蛋白質(zhì)可能需要更多的核酸探針來形成復(fù)合物。 在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)進(jìn)行探針與蛋白間結(jié)合反應(yīng)的試驗(yàn),確定試驗(yàn)體系最適合的蛋白質(zhì)/探針比例。
3. 核酸探針標(biāo)記方式:不同的標(biāo)記方法會對核酸探針稀釋度產(chǎn)生影響。有時減小放射性核酸探針的用量可能為簡化操作提供了方便。
一般來說,最好在每個實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行探針用量的測試,并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。通常建議使用約50-200 fmol的標(biāo)記探針,同時增加控制實(shí)驗(yàn)組以幫助正確解讀結(jié)果。
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