考馬斯亮藍染色法實驗介紹【考馬斯亮藍染色外包】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
考馬斯亮藍染色法介紹由普拉特澤生物分享,在蛋白質(zhì)染色方法中,目前以考馬斯亮藍染色最為常用,因為它既克服了氨基黑染色靈敏度不高的限制,又比銀染簡便易操作。普拉特澤的生物病理實驗平臺長期為廣大生物醫(yī)學人員提供考馬斯亮藍染色實驗外包服務。
1、考馬斯亮藍染色介紹
考馬斯亮藍染色是用考馬斯亮藍進行蛋白質(zhì)染色的方法??捡R斯亮藍是一種陰離子染料, 常用考馬斯亮藍G250和R250??捡R斯亮藍 G250在游離狀態(tài)下呈紅色,當它與蛋白質(zhì) 通過疏水結(jié)合后變?yōu)樗{色,蛋白質(zhì)-色素結(jié) 合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光 吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。
2、考馬斯亮藍染色的歷史
考馬斯亮藍染色最早由 Fazekas 等在 1963 年用于醋酸纖維素膜電泳,并認為同樣可用于紙電泳,瓊脂糖電泳和淀粉凝膠電泳。1965 年 Meyer 等將此方法應用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。
3、考馬斯亮藍染色的靈敏度
考馬斯亮藍染色可以達到 0.2~0.5 μg(200~500 ng),最低可檢出 0.1 μg蛋白;銀染的靈
敏度比考染高將近 100 倍,最低可以檢出 2 ng 蛋白,通過考染條帶的深淺粗細,可以大致判斷該條帶有多少蛋白。
4、考馬斯亮藍染料的種類
考馬斯亮藍分為 R-150、R-250、R-350、G-250 等。其中 R-350 最為靈敏,R 為紅藍色,G為綠藍色。R-250 即三苯基甲烷,每個分子含有兩個 SO3H 基團,偏酸性,與氨基黑一樣也是結(jié)合到蛋白質(zhì)的堿性基團上。G-250 即二甲花青亮藍,是一種甲基取代的三苯基甲烷。
推薦一種考染的方法
⑴ 電泳后的凝膠立即浸泡在固定液(500 ml 乙醇,100 ml 冰醋酸,400 ml 蒸餾水)中
至少 30 min,如有必要可在固定液中浸泡過夜;
⑵ 將固定后的凝膠在熱的染色液(0.29 g 考馬斯亮藍溶解在 250 ml 脫色液中,在使用前
邊攪拌邊加熱至 60℃)中浸泡 10 min,然后用蒸餾水將凝膠淋洗一次;
⑶ 多次變換脫色液(250 ml 乙醇,80 ml 冰醋酸,加蒸餾水至 1 L),直至凝膠背景脫凈
為止,為加快脫色,可略加溫度;以上各步最好用振蕩器(搖床)震蕩染色皿。
⑷ 為了防止凝膠干燥后的龜裂,脫去背景色的凝膠在保存液(25 ml 87% 甘油加 225 ml 脫
色液)中浸泡 30 min。然后將凝膠放在玻璃板上,再用保存液浸濕玻璃紙包住凝膠在室溫下晾干。
如果您也準備考馬斯亮藍染色的考馬斯亮藍染色的方法不是唯一的,你可以參考幾種之后總結(jié)一個適合自己的方案出來,有什么不懂得歡迎隨時給普拉特澤留言~