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  大家好，今天普拉特澤生物跟大家一起學習一個新的實驗——細胞劃痕實驗。細胞劃痕實驗（WoundHealing）是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫痛侵襲的體外試驗方法。細胞劃痕實驗介紹由普拉特澤細胞實驗平臺分享，細胞平臺專門為科研工作者提供細胞劃痕實驗代做服務，提供結果真實，技術高質量的細胞實驗服務?，F(xiàn)在我們就來看看細胞劃痕實驗的原理和應用流程吧！

  細胞劃痕實驗是測定細胞遷移運動與修復能力的常用方法，類似體外傷口愈合模型，故又稱傷口愈合法。細胞劃痕實驗的原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”俞臺，基本的步騾包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

  細胞劃痕實驗的操作主要是：在體外將細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)皿或平板上，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為"劃痕"。然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使"劃痕"愈合，每間隔一段時間（如間隔12小時），顯微鏡下拍照，記錄細胞向中央空白區(qū)遷移情況，以此判斷細胞的遷移能力。

        1、細胞接種

        2、細胞劃痕

        3、細胞遷移期間圖像拍照

        3、數(shù)據(jù)處理。

        那細胞劃痕實驗可以應用在哪些方面呢？給大家介紹一個案例（文末附參考文獻）。

        細胞劃痕實驗可用于：硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復中的作用研究

        1、自動平臺上制造軟骨細胞劃痕模型。

        2、通過劃痕閉合情況，獲得CS促進軟骨損傷修復的最佳濃度。

        3、研究硫酸軟骨素和地塞米松對軟骨細胞損傷修復的影響。

        研究方法：

        1、體外提取、培養(yǎng)原代SD大鼠關節(jié)軟骨細胞，通過細胞形態(tài)學及II膠原免疫熒光染色方法進行細胞鑒定。

        2、應用自動平臺制造軟骨細胞劃痕模型。

        3、實時監(jiān)測觀察軟骨細胞劃痕的閉合過程。

        4、應用計數(shù)有劃痕處固定相等區(qū)域內(nèi)軟骨細胞數(shù)目，確定促進軟骨細胞愈合的最佳硫酸軟骨素（CS）濃度。

        5、應用live/dead kit staining方法觀察細胞存活率。

        6、應用免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）檢測單純劃痕組、CS組、地塞米松組、CS和地塞米松共同作用組對I型及II型膠原的表達情況。

        實驗結果：

        1、應用自動平臺制造出8通道的劃痕，劃痕具有水平的起點、止點及相同的寬度。

        2、濃度為200μg/ml的CS對于軟骨細胞劃痕愈合的促進作用最大。

        3、兩種藥物共同作用時CS可減輕地塞米松對于軟骨細胞增殖的抑制作用，I型膠原表達量較單獨應用地塞米松組減少，II型膠原表達量則增多。

        實驗結論：

        1、硫酸軟骨素對于軟骨細胞劃痕愈合具有促進作用，且在濃度200μg/ml時作用效果最佳。

        2、硫酸軟骨素對于糖皮質激素引起的軟骨損傷具有修復作用。如臨床應用糖皮質激素，可加用硫酸軟骨素保護關節(jié)軟骨。

        好啦，那關于細胞劃痕實驗的簡單介紹我們就講到這里啦，有細胞實驗不懂的問題或者需要細胞實驗外包可以留言，咱們會逐一聯(lián)系，詳細溝通的哦！

        【參考文獻】

        Culture of bovine articular chondrocytes in funnel-like collagen-PLGA hybrid sponges This work was presented at the International Union of Materials Research Societies（International Conference in Asia）（Qingdao,China,Sep.25–28 2010）.[J].Hongxu Lu,Young-Gwang Ko,Naoki Kawazoe,Guoping Chen.Biomedical Materials.2011(4)

        殷貴鯤.硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復中的作用[D].大連醫(yī)科大學,2014.