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  前兩篇我們總結了Transwell檢測實驗報告、Transwell遷移實驗報告；今天來重點學習學習Transwell侵襲實驗具體實驗流程，下面鏈接可以直接點開跳轉(zhuǎn)哦。
上篇：Transwell檢測實驗報告【整理】
中篇： Transwell遷移實驗報告【細胞實驗外包】

鏈接奉上，那現(xiàn)在我們來接著Transwell侵襲實驗報告：

一、實驗目的

通過Transwell實驗檢測Hela細胞轉(zhuǎn)染CDC20-sgRNA3或SP600125處理后其侵襲能力的變化。

二、實驗樣品及分組

1. 實驗樣本

備注：包括干預細胞用的相關試劑均按實驗樣品登記，每行登記一個或一組獨立樣品

2. 實驗分組

細胞：Hela

分組：sgRNA-NC、CDC20-sgRNA3

處理：Con（0.1% DMSO）、SP600125處理（20 μM，48h）

三、實驗結果

四、實驗材料

1. 主要實驗儀器

2. 主要實驗試劑及耗材

五、實驗原理

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室最方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法；由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。

侵襲：侵襲是Transwell實驗的一種，將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，小室底部鋪了一層聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠，用以模仿體內(nèi)細胞外基質(zhì)，細胞欲進入下室，先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）將基質(zhì)膠降解，方可通過聚碳酸酯膜。通過結晶紫然后后測定細胞計數(shù)值可反映腫瘤細胞的侵襲能力。細胞侵襲實驗可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

六、實驗步驟

1.細胞復蘇

(1) 將ddH₂O預溫至37℃。

(2) 戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細胞的凍存管（內(nèi)有1 mL細胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內(nèi)快速溶解。

(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進超凈臺。

(4) 在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。

(5) 1mL培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細胞培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

(6) 48小時后換液，細胞融合接近80%時即可傳代。

2. 細胞培養(yǎng)

Hela細胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基在37℃飽和濕度、含5%CO₂的孵箱中培養(yǎng)。

3. 細胞轉(zhuǎn)染

(1) 鋪板：處于對數(shù)生長期的目的細胞，胰蛋白酶消化成單細胞懸液，按實驗需要接種于6孔板（2×10⁵個細胞/孔），根據(jù)細胞大小和形狀調(diào)整接板細胞量。

(2) 培養(yǎng)：37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，待細胞長至50%~60%匯合度進行轉(zhuǎn)染。

(3) 質(zhì)粒和脂質(zhì)體準備：用125μL不含血清的培養(yǎng)基孵育4μg目的片段；125μL不含血清的培養(yǎng)基孵育8μL Lipo漢恒，靜置5min；將含質(zhì)粒和含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基混合，混勻后室溫靜置20min。

(4) 棄去板中原有培養(yǎng)基，把混合液加入到細胞培養(yǎng)板中；4~6h后換成完全培養(yǎng)基。

(5) 繼續(xù)培養(yǎng)24-48h。

4. 侵襲實驗

(1) 用無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel基質(zhì)膠，小室各加100μl（20-30μg/孔），放入37℃培養(yǎng)箱中待其凝固，出現(xiàn)“白色層”取出小室；

(2) 取出小室后，加入500 μL無血清培養(yǎng)基，放入37℃培養(yǎng)箱中水化30min；

(3) 吸掉已充分浸潤基底膜后小室內(nèi)的培養(yǎng)基；

(4) 侵襲：胰酶消化收集狀態(tài)良好的目的細胞（已轉(zhuǎn)染），制成單細胞懸液（無血清培養(yǎng)基配置，藥物處理組含藥物）；上室加200μL已調(diào)節(jié)好細胞密度的細胞懸液（2×10⁴個）；下室加500μL全培養(yǎng)基（小室外，24孔板孔內(nèi)；藥物處理組含藥物）；

(5) 于37℃、5% CO₂細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)相應時間；

(6) 用4%多聚甲醛室溫固定20min，用棉簽輕柔擦拭以去除侵襲小室內(nèi)未侵過基底層膜的細胞，以及基底層（Matrigel），小心操作以免刺穿底層聚碳酸酯膜；

(7) 在新的24孔板孔中加500μL結晶紫，分別將侵襲小室浸入室溫染色10 min；

(8) 用PBS沖洗掉小室上多余的染料，置于空氣中晾干；

(9) 100倍顯微鏡拍照，再用PS計數(shù)，計算各孔穿過膜的細胞數(shù)量。

好啦，Transwell侵襲實驗報告我們就簡單介紹到這里啦，同學們有沒有一個簡單的了解呢？不懂得可以給客服留言技術給您詳細解答。下一篇再詳細為大家介紹Transwell誘導單層細胞屏障，普拉特澤生物大家透徹Transwell實驗的檢測過程。當然若果您有 Dot Blot實驗方法或其他醫(yī)學科研實驗外包的需求，歡迎隨時咨詢哦