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細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180~200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，會(huì)暴露的3'-OH末端。

熒光法：暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素標(biāo)記的dUTP，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測；

DAB法：暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上生物素標(biāo)記的dUTP，隨后和辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合，隨后在HRP的催化下通過DAB顯色來檢測細(xì)胞凋亡的情況。

TUNEL檢測通常被應(yīng)用于臨床診療與科學(xué)研究，臨床診療像腫瘤的放化療，是通過TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況從而判斷病人的治療情況；而科學(xué)研究像藥物研發(fā)是從促進(jìn)或抑制細(xì)胞凋亡的效果來判斷有沒有臨床治療效果。

TUNEL染色過程中注意以下幾點(diǎn)：

1、洗滌蛋白酶K時(shí)，一定要PBS沖洗3次，如果沖洗不凈會(huì)嚴(yán)重干擾后續(xù)的標(biāo)記反應(yīng)；

2、3%的過氧化氫溶液孵育時(shí)間不應(yīng)過長，否則會(huì)出現(xiàn)過氧化氫導(dǎo)致的DNA斷裂，產(chǎn)生假陽性；

3、滴加TUNEL檢測液時(shí)，可利用防蒸發(fā)膜防止其蒸發(fā)影響樣本的生物素標(biāo)記；、

4、配制好的DAB顯色液必須一次性使用完畢，不宜凍存。

對于不同的樣本有不同的前處理過程，

詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)點(diǎn)此跳轉(zhuǎn)

TUNEL染色檢測細(xì)胞增殖  視頻教程地址（建議微信打開）：http://weike.fm/bXFx64d171