
外泌體提取的具體方法及步驟
2023-08-24 17:22:54
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
外泌體提取的具體方法及步驟由普拉特澤生物工具平臺總結(jié)分享,工具平臺為廣大科研實(shí)驗(yàn)人員提供外泌體提取實(shí)驗(yàn)服務(wù),先一起來學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)外泌體提取的具體方法及步驟吧~
以下是外泌體提取的詳細(xì)步驟:
樣本收集:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,選擇合適的樣本,如細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血漿、尿液等含有外泌體的樣本。收集樣本時(shí)要注意避免細(xì)胞碎片和大顆粒物質(zhì)的污染。
樣本預(yù)處理:將樣本進(jìn)行低速離心,通常在300-2,000 g的離心力下離心10-20分鐘,以去除細(xì)胞碎片和大顆粒物質(zhì)。離心條件可以根據(jù)樣本類型和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
進(jìn)一步離心:將上一步得到的上清液進(jìn)行更高速度的離心,通常在10,000-20,000 g的離心力下離心30分鐘,以沉淀外泌體。離心時(shí)間和離心力可以根據(jù)樣本類型和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
洗滌:將外泌體沉淀用PBS(磷酸鹽緩沖液)或其他合適的洗滌緩沖液進(jìn)行洗滌,去除雜質(zhì)。洗滌時(shí)可以輕輕攪拌或振蕩,以幫助去除雜質(zhì)。
再次離心:將洗滌后的外泌體沉淀用更高速度的離心力離心,通常在100,000 g的離心力下離心1小時(shí),以沉淀外泌體。離心時(shí)間和離心力可以根據(jù)樣本類型和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
上清液去除:將上清液盡量去除,保留外泌體沉淀??梢允褂梦芑蛞埔浩餍⌒牡匚锨逡?。
再次洗滌:將外泌體沉淀用PBS或其他合適的洗滌緩沖液進(jìn)行再次洗滌,去除殘留的雜質(zhì)。洗滌時(shí)可以輕輕攪拌或振蕩。
再次離心:將洗滌后的外泌體沉淀用更高速度的離心力離心,通常在100,000 g的離心力下離心1小時(shí),以沉淀外泌體。離心時(shí)間和離心力可以根據(jù)樣本類型和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
上清液去除:將上清液盡量去除,保留外泌體沉淀??梢允褂梦芑蛞埔浩餍⌒牡匚锨逡骸?/p>
再次洗滌:將外泌體沉淀用PBS或其他合適的洗滌緩沖液進(jìn)行再次洗滌,去除殘留的雜質(zhì)。洗滌時(shí)可以輕輕攪拌或振蕩。
最后一次離心:將洗滌后的外泌體沉淀用更高速度的離心力離心,通常在100,000 g的離心力下離心1小時(shí),以沉淀外泌體。離心時(shí)間和離心力可以根據(jù)樣本類型和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
上清液去除:將上清液盡量去除,保留外泌體沉淀。可以使用吸管或移液器小心地吸除上清液。
再次洗滌:將外泌體沉淀用PBS或其他合適的洗滌緩沖液進(jìn)行再次洗滌,去除殘留的雜質(zhì)。洗滌時(shí)可以輕輕攪拌或振蕩。
外泌體沉淀的保存:將洗滌后的外泌體沉淀用適當(dāng)?shù)木彌_液進(jìn)行懸浮,可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析。外泌體可以在-80°C的冰箱中保存,避免多次凍融。
需要注意的是,外泌體提取的具體方法和步驟可能會因?qū)嶒?yàn)?zāi)康?、樣本類型和?shí)驗(yàn)條件的不同而有所變化,上述步驟僅供參考。在進(jìn)行外泌體提取實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。

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