細(xì)胞操作的無(wú)菌環(huán)境與操作要點(diǎn)【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包】
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
今天普拉特澤生物來(lái)跟大家一起學(xué)習(xí)的是:細(xì)胞操作的無(wú)菌環(huán)境與操作要點(diǎn)。普拉特澤細(xì)胞平臺(tái)為廣大科研工作者提供各類(lèi)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)代做與細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)服務(wù),實(shí)驗(yàn)操作時(shí)嚴(yán)格在無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行同時(shí)遵守各項(xiàng)無(wú)菌操作要領(lǐng),保證樣本不受污染與結(jié)果的正確性。細(xì)胞在脫離體內(nèi)的環(huán)境后,沒(méi)有了保護(hù)防線(xiàn),極其容易被支原體、細(xì)菌真菌等感染,造成樣本的破壞損失影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因此無(wú)菌操作在所有的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中都是非常重要但又常犯的錯(cuò)誤,今天我們就來(lái)看看細(xì)胞操作的無(wú)菌環(huán)境到底是怎樣的,無(wú)菌操作要點(diǎn)有哪些。
一、細(xì)胞的無(wú)菌操作環(huán)境
在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中,防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。無(wú)菌技術(shù)就像是一道屏障很大程度上保護(hù)細(xì)胞不受環(huán)境微生物的污染。無(wú)菌環(huán)境的基本要素包括:
1、實(shí)驗(yàn)員穿戴好一次性帽子、口罩、手套以及實(shí)驗(yàn)服才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室;
2、實(shí)驗(yàn)操作前,打開(kāi)超凈工作臺(tái)紫外燈照射30-60min滅菌,后用75%酒精擦拭操作臺(tái)面并打開(kāi)超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)通風(fēng);
3、槍頭、培養(yǎng)皿、離心管等常用耗材需要通過(guò)傳遞倉(cāng)紫外消毒后進(jìn)入細(xì)胞間,再拿到超凈臺(tái)內(nèi)再行拆封使用;
4、冰箱中取出培養(yǎng)基復(fù)溫,將培養(yǎng)基以及實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配置的溶液試劑噴涂75%的酒精后放入超凈工作臺(tái)中;
5、在打開(kāi)培養(yǎng)箱之前,實(shí)驗(yàn)員的手和培養(yǎng)箱需要先噴涂酒精擦拭,消毒后再將細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出放置于超凈工作臺(tái)中。
二、細(xì)胞無(wú)菌操作的要點(diǎn)
根據(jù)操作的需求,我們將工作臺(tái)劃分為三個(gè)區(qū)域:分別是潔凈區(qū)、操作區(qū)和污染區(qū)。
培養(yǎng)基槍頭、培養(yǎng)皿等細(xì)胞培養(yǎng)常用的試劑耗材放置在潔凈區(qū),酒精燈、移液槍、待處理的細(xì)胞等操作中需要用到的物品放置在操作區(qū),打火機(jī)、記號(hào)筆、廢液缸等放置在污染區(qū)。
進(jìn)行操作前,需要要點(diǎn)燃酒精燈。我們將酒精燈火焰附近10cm范圍內(nèi)視為無(wú)菌區(qū),為了保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的無(wú)菌環(huán)境,所有的操作盡量在無(wú)菌區(qū)進(jìn)行。操作時(shí)我們要注意:
1、打開(kāi)瓶蓋前,需要對(duì)瓶頸、螺旋蓋進(jìn)行灼燒,瓶蓋打開(kāi)后將敞開(kāi)一側(cè)朝下放在無(wú)菌區(qū)內(nèi)。瓶口敞開(kāi)期間,手和其他物品不可從上方經(jīng)過(guò)。移液操作盡可能迅速,操作完后立即灼燒螺旋蓋消毒后蓋上。
2、移液操作時(shí)用到的槍頭必須保證無(wú)菌,移液槍在使用時(shí)槍身不能碰到容器內(nèi)側(cè),如果移液槍在使用過(guò)程中被液體污染需更換新的移液槍。
3、無(wú)菌槍頭均為一次性使用,如果在使用過(guò)程中不小心脫落,需更換新槍頭。移液過(guò)程中如果有試劑不小心滴落在超凈臺(tái)面上,需用75%的酒精擦拭干凈。
4、廢液在棄去時(shí),需使用移液槍操作,不可直接倒入廢液缸中,以防液體飛濺污染瓶口。全部操作結(jié)束后,方可蓋上酒精燈蓋熄滅火焰。
5、用完的試劑用封口膜封住后,移出操作臺(tái),放回4℃儲(chǔ)存。潔凈的槍頭、培養(yǎng)皿、移液槍等可繼續(xù)放置在超凈臺(tái)內(nèi),廢液缸需清理洗凈,用酒精消毒后再放回超凈臺(tái)。
6、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面用75%酒精噴灑后再用無(wú)菌布擦拭干凈,最后關(guān)閉玻璃門(mén),打開(kāi)紫外燈消毒30-60 min,為下一次的實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
在細(xì)胞培養(yǎng)操作中為了保證細(xì)胞能健康成長(zhǎng),我們需要杜絕因?yàn)椴僮鞫鴮?dǎo)致的污染,努力地為細(xì)胞提供無(wú)菌的培養(yǎng)環(huán)境。所以如果您也有過(guò)因?yàn)椴灰?guī)范的培養(yǎng)或不知道怎樣無(wú)菌操作而污染過(guò)細(xì)胞,那普拉特澤生物一定要跟您一起學(xué)習(xí)共勉啦。
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