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        大家好，今天普拉特澤生物繼續(xù)跟大家一起來學(xué)習(xí)生物醫(yī)學(xué)研究的新熱點——細胞焦亡。本文由普拉特澤生物細胞實驗平臺給大家詳細分享，文尾附有細胞焦亡概述、文獻、方法打包視頻供大家學(xué)習(xí)，現(xiàn)在我們就來學(xué)習(xí)細胞焦亡的研究方法與檢測方式吧！

        首先是細胞焦亡的特點：

        細胞焦亡發(fā)生時，細胞會發(fā)生腫脹，在細胞破裂之前，細胞上形成凸出物(圖1，早期細胞焦亡)，之后細胞膜上形成孔隙，使細胞膜失去完整性，釋放內(nèi)容物，引起炎癥反應(yīng)，此時，細胞核位干細胞中央(圖1，晚期細胞焦亡)，隨著形態(tài)學(xué)的改變，細胞核固縮，DNA斷裂。

        細胞焦亡過程，具有caspase-1依賴性。在外界條件的刺激下，caspase-1前體可以與模式識別受體NLRP1、NLRP3等通過接頭蛋白ASC變?yōu)橐粋€高分子復(fù)合物，即炎癥小體，也稱依賴 caspase-1的炎癥小體。細胞在caspase-1激活同時會釋放出炎性因子白細胞介素-1β(interleukin-1βIL-1)和IL-18，進而吸引更多的炎性細胞，加重炎癥反應(yīng)。焦亡發(fā)生時形成子隙，它允許細胞質(zhì)的內(nèi)容物，如乳酸脫氣酶(lactate dehvdrogenase，LDH)和炎性細胞因子釋放，熒光標記的膜朕蛋白V，7-氨基放線菌D或碘化丙啶進入細胞。

        其次是細胞焦亡的信號通路：

        細胞焦亡屬于炎癥性死亡途徑，按激活機制，可分為Caspase-1依賴和不依賴兩種途徑。兩種途徑都是通過切割GSDMD后形成N端游離的肽殷，這一肽殷會誘導(dǎo)細胞形成孔道并導(dǎo)致細胞破裂，釋放胞質(zhì)成分。兩種途徑都能同時誘導(dǎo)IL-1B和IL-18的前體進行切割，形成成熟的IL-1和IL-18。不同的只是是否直接激活Caspase-1。

        然后就是我們本文的重點，細胞焦亡的研究方法：

        細胞焦亡的機制中GSDMD的切割，IL-1B和IL-18前體的切割成熟和釋放是關(guān)鍵信號，因此證明所誘發(fā)的細胞死亡方式是否為細胞焦亡，需要幾個關(guān)鍵的實驗證據(jù):

        (1)GSDMD的切割(Western檢測);

        (2)Caspase的激活，主要是Caspase-1，Caspase-4，Caspase-5，Caspase-11。(Western檢測);

        (3)IL-1β和IL-18前體的切割成熟和釋放(Western，ELISA等);

        (4)細胞形態(tài)學(xué)檢測(CCK-8等);

        (5)染色質(zhì)完整性檢測(Tunel等)。

        而細胞焦亡完整檢測方式如下:

        1、形態(tài)變化

        (1)掃描電鏡觀察細胞形態(tài);

        (2)免疫熒光染色(GSDMD/GSDME);

        (3)Tunel檢測;

        2、檢測焦亡相關(guān)基因及蛋白

        (1)q-PCR/Western Blot方法檢測焦亡相關(guān)基因或蛋白的表達水平(例如，Caspase-14、5、11;GSDMD;Cleaved Caspase-3IL-1BIL-18NLRP3ASC等);

        (2)ELISA試劑盒檢測炎癥因子的水平;(3)CCK8法測定細胞活力;

        (3)免疫組化檢測組織蛋白的表達。

        細胞焦亡的研究方法與檢測方式我們就講完啦，想學(xué)習(xí)更多細胞焦亡內(nèi)容的可點擊《細胞焦亡專題》全面學(xué)習(xí)呀，有更多的建議或者關(guān)于細胞焦亡研究內(nèi)容的補充歡迎給客服留言，歡迎探討哦。