細胞增殖檢測之EdU法及其應用
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
前兩篇我們總結了檢測EDU技術的方法以及EDU檢測細胞增殖結果是如何分析的,今天來學習細胞增殖檢測時關于EdU法及其應用,讓我們一起來回顧一下看看吧,溫故而知新。
鏈接奉上,大家快點踩著普拉特澤的肩膀去摘蘋果吧!那現在我們來接著總結:
EdU法是一種基于細胞內新合成DNA的標記方法,用于評估細胞的增殖活性。之前我們也提到EdU的原理簡介,讓我們再務實一下基礎吧!過下面將詳細介紹EdU法的原理和應用。
原理: EdU(5-乙炔基-2’-脫氧尿苷)是一種類似于脫氧尿苷(dU)的核苷酸,它具有一個乙炔基團。在細胞培養(yǎng)基中添加EdU后,細胞會主動攝取EdU并將其嵌入到新合成的DNA鏈中。與傳統的BrdU法不同,EdU法不需要使用酸性脫氧核糖核酸酶(DNase)來使DNA鏈斷裂,因此可以避免DNA斷裂的非特異性效應。
在EdU法中,通過使用熒光染料或特定的抗體與EdU結合,可以將EdU標記的DNA可視化。這種結合可以通過點擊化學反應實現,其中EdU上的乙炔基與標記物上的點擊試劑(例如,含有偶氮基團的染料或生物素)發(fā)生共軛反應。通過熒光顯微鏡觀察或流式細胞術分析,可以計算標記陽性細胞的數量,從而評估細胞的增殖活性。
EdU法在細胞生物學研究中有廣泛的應用。以下是一些常見的應用領域:
細胞增殖評估:通過檢測EdU標記的細胞數量,可以定量評估細胞的增殖活性。這對于研究細胞周期的調控機制、細胞增殖的動力學過程以及評估細胞增殖抑制劑的效果非常有用。
組織再生研究:EdU法可以用于研究組織再生過程中的細胞增殖。例如,在小鼠肝臟再生研究中,可以通過注射EdU來標記再生肝細胞,并通過檢測EdU標記的細胞數量來評估肝臟再生的程度。
腫瘤生長研究:EdU法可以用于研究腫瘤細胞的增殖活性。通過標記腫瘤細胞中的EdU,可以觀察腫瘤細胞的增殖速率,并評估抗腫瘤藥物的療效。
發(fā)育過程研究:EdU法可以用于研究發(fā)育過程中的細胞增殖。例如,在胚胎發(fā)育研究中,可以通過注射EdU來標記正在增殖的細胞,并通過檢測EdU標記的細胞數量來研究胚胎發(fā)育的動態(tài)過程。
關于EdU 檢測應用:
【1】將EdU作為細胞增殖的分子探針,應用于高含量的siRNA (high-content siRNA, HCS)篩選實驗,對細胞增殖進行評估。
【2】Wiebusch等使用EdU和流式細胞儀研究人巨細胞病毒細胞周期的基因表達。EdU在用于檢測細胞增殖的很多實驗中發(fā)揮了突出的作用,展現了其廣闊的應用前景。
【3】EdU標記技術在細胞培養(yǎng)中的應用是最基本的,Hiraoka等【3】用EdU標記非雄激素依賴型前列腺癌PC3細胞, 根據低氯離子濃度的培養(yǎng)基組, DNA中有EdU摻入的細胞數目較對照組減少, 得出低氯離子濃度會延長細胞周期的各個階段, 而導致整個細胞周期的終止。
【4】Zeng等用EdU標記法檢測成體動物神經系統的細胞增殖, 并與傳統的BrdU標記方法相對照, 充分肯定了EdU用于檢測細胞增殖的可行性。
【5】在植物細胞培養(yǎng)中, Kotogány等通過用EdU標記植物細胞(玉米、水稻、擬南芥等)進行實驗, 相對于3H-TdR和BrdU,EdU檢測植物細胞增殖不需要進行細胞壁的消化,節(jié)省了DNA變性的步驟,減少了整個細胞增殖檢測實驗的時間, 更有效并真實地展示了細胞、細胞核以及染色體的形態(tài)學特征。
綜上所述,EdU標記S期細胞及檢測細胞增殖是一種可靠、通用、快速、簡單以及沒有放射性的方法,同時可以結合其他標記進行多參數的分析, 具有簡單、快速、準確和兼容的特點, 適合多種研究方式和多層次分析, 這一方法必將在細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復和病毒復制等方面的研究中發(fā)揮重要作用
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