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        今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是細(xì)胞增殖檢測(cè)的注意事項(xiàng)，文末附上細(xì)胞增殖檢測(cè)操作的視頻教程，目前常用的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法有MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖、 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖、 Edu法檢測(cè)細(xì)胞增殖等。下面就針對(duì)于這三種常用檢測(cè)方法的注意事項(xiàng)一一講述： 

        一、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖注意事項(xiàng)：

        1、 MTT的配制：MTT對(duì)菌和光十分敏感，配制過程中注意無菌環(huán)境及避光，使用超凈臺(tái)配制時(shí)，可以將超凈臺(tái)的燈光先關(guān)掉。MTT具有致癌性，在配制的過程中，應(yīng)注意防護(hù)，避免藥物直接觸碰皮膚。

        2、細(xì)胞接種密度的確定：細(xì)胞密度控制在103-104之間。若密度太大，細(xì)胞對(duì)藥物敏感性降低；若密度過小，則差異性太小。

        3、血清的影響：高濃度的血清會(huì)對(duì)細(xì)胞的光吸收值長(zhǎng)生影響，故細(xì)胞培養(yǎng)使用的血清濃度應(yīng)該控制在10%以下。

        4、設(shè)置凋零空和空白組，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        5、注意測(cè)試藥物是否與MTT發(fā)生反應(yīng)：某些具有氧化還原性質(zhì)的藥物，會(huì)與MTT發(fā)生反應(yīng)，將MTT還原成為棕褐色沉淀，故如存在此類藥物，應(yīng)在加入MTT前，用PBS對(duì)細(xì)胞清洗。

        6、終止培養(yǎng)，溶解結(jié)晶：去除上清時(shí)，勿將MTT結(jié)晶體吸走，操作慎重，以免影響吸光值。

        二、CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖注意事項(xiàng)

        1、根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)胞的種類和細(xì)胞數(shù)量來確定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)胞培養(yǎng)1-4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測(cè)或使用酶標(biāo)儀觀察染色程度，若染色不充分，再將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

        2、保證培養(yǎng)箱和培養(yǎng)板中間孔的濕度。培養(yǎng)板中間孔的濕度可以使用PBS填充邊緣孔的方法來解決。

        3、添加CCK-8試劑時(shí)，速度要快，避免藥劑在墻頭上停留時(shí)間過長(zhǎng)，對(duì)藥物濃度產(chǎn)生影響。也可在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8。

        三、EDU法檢測(cè)細(xì)胞增殖注意事項(xiàng)

        1、加入含有Edu的培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基的用量以沒過細(xì)胞為適宜。

        2、根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類不同，確定細(xì)胞生長(zhǎng)周期，再進(jìn)一步確定Edu培養(yǎng)基的培養(yǎng)時(shí)間，大多數(shù)細(xì)胞為2小時(shí)培育時(shí)間。

        3、固定細(xì)胞前，使用PBS清洗未進(jìn)入細(xì)胞DNA的Edu，一般清洗次數(shù)為1-2次，每次5分鐘，也根據(jù)不同的細(xì)胞選擇清洗強(qiáng)度，避免細(xì)胞流失，造成密度不同。

        4、染色完成后，最好立即進(jìn)行觀察 。如若條件限制，請(qǐng)4℃避光保存，保存時(shí)間不宜過長(zhǎng)，不超過3天。

        好啦，那關(guān)于MTT檢測(cè)、CCK8檢測(cè)、EDU檢測(cè)細(xì)胞增殖時(shí)的注意事項(xiàng)我們就總結(jié)完啦，視頻操作請(qǐng)點(diǎn)擊：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)因個(gè)體操作的原因大家要注意的問題肯定更多，歡迎大家留言補(bǔ)充自己總結(jié)的細(xì)胞增殖操作是的注意事項(xiàng)，有需要細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)外包的服務(wù)的老師也歡迎大家留言咨詢。