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        植物細胞的培養(yǎng)方法由普拉特澤生物——細胞實驗平臺為大家總結(jié)分享。細胞實驗平臺專業(yè)承接各類細胞實驗外包代做服務(wù)，細胞培養(yǎng)作為細胞實驗的基建部分技術(shù)當然是爛熟于心。上期我們講完了植物組織的培養(yǎng)方法，今天來看看和組織培養(yǎng)相關(guān)的植物細胞的培養(yǎng)方法：

        一、從外植體分離植物細胞

        1、選擇適當生長期的健康植株。

        2、對外植體消毒處理

        (1)沖刷材料，用流水幾分鐘—數(shù)小時

        (2)表面浸潤滅菌;超凈臺70%酒精10-30S

        (3)深層滅菌; 氯化汞次氯酸鈉

        (4)無菌水沖洗。3 min/次3-10次

        二、通過愈傷組織誘導獲取植物細胞

        獲得愈傷組織后，挑選質(zhì)量好的愈傷組織塊，用無菌的鑷子或小刀分割得到植物小細胞團，也可以將愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，加入經(jīng)過滅菌處理的玻璃珠，進行振蕩培養(yǎng)，使愈傷組織分散成為小細胞團或單細胞，然后用適當孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去大細胞團和殘渣，得到一定體積的小細胞團或單細胞懸浮液。

        三、細胞培養(yǎng)

        1、懸浮細胞培養(yǎng)

        懸浮培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)的基本方法，是將單個游離細胞或小細胞團在液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。懸浮細胞樣本的選擇要求為松散性好，增殖快，再生能力強。

        2、懸浮細胞培養(yǎng)同步化

        植物細胞在懸浮培養(yǎng)中的游離性較差，容易團聚進入不同程度的分化狀態(tài)，因此要達到完全同步化相當困難?？赏ㄟ^以下四個方法使其同步化：

        （1）體積選擇法：通過細胞體積大小分級，直接將處于相同周期的細胞進行分選，然后將同一狀態(tài)的細胞繼代培養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中。

        （2）饑餓法：在一個培養(yǎng)體系中，如果細胞生長的基本成分喪失，則導致細胞因饑餓而分裂受阻，從而停留在某一分裂時期。

        （3）抑制法:通過一些DNA合成抑制劑處理細胞，使細胞滯留在DNA合成前期，當解除抑制后，即可獲得處于同一細胞周期的同步化細胞。

        （4）低溫法：冷處理也可提高培養(yǎng)體系中細胞同步化程度。

        3、單細胞培養(yǎng)

        在進行細胞株(種子細胞)選擇和需要對細胞活動跟蹤觀察的情況下，必須進行真正意義上的單細胞培養(yǎng)。由于植物細胞的團聚性，單細胞培養(yǎng)還比較困難，而懸浮培養(yǎng)不能對某一細胞進行定點觀察和分析，也就不能進行定點選擇。主要包括以下三種培養(yǎng)方法：

        （1）平板培養(yǎng)

        l 平板培養(yǎng)是將一定密度的懸浮細胞接種到一薄層固體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的技術(shù)主要步驟為：

        l 單細胞的分離：用于平板培養(yǎng)的小細胞團不能超過6個細胞，所以過濾時篩網(wǎng)的網(wǎng)孔大小要合適。

        l 單細胞懸浮液的制備：分離的單細胞經(jīng)低速離心，培養(yǎng)液洗滌2次后，調(diào)整密度為5x10⁵/ml。

        l 植板：將1份已調(diào)整好密度的單細胞懸浮液與4份35℃的固體培養(yǎng)基充分混合均勻，然后均勻地平鋪于培養(yǎng)皿中，厚度約1~2 mm。

        l 封口：用石蠟膜封培養(yǎng)皿。

        （2）看護培養(yǎng)

        看護培養(yǎng)是指在固體培養(yǎng)基上置入一塊活躍生長的愈組織，再在愈傷組織上放一小片濾紙，待濾紙濕潤后將細胞接種于濾紙上。當培養(yǎng)細胞長出微小細胞團以后，將其直接轉(zhuǎn)至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長

        （3）微室培養(yǎng)

        人工制造一個小室，將單細胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細胞團。它可對單細胞進行活體連續(xù)觀察，這一方法也可用于原生質(zhì)體培養(yǎng)觀察細胞壁的再生和細胞分裂過程。

        4、原生質(zhì)體培養(yǎng)

        原生質(zhì)體具有全能性、無細胞壁障礙、吸收能力強、分泌能力高、可進行細胞融合等特點。操作步驟主要是：

        l 基礎(chǔ)材料準備

        l 預處理與酶解(或機械破壁)

        l 原生質(zhì)體收集與純化

        l 原生質(zhì)體活力測定

        好啦，那關(guān)于植物細胞的培養(yǎng)方法我們就介紹到這里啦，如果您有更多不懂的問題咨詢、細化學習某一培養(yǎng)步驟或是細胞實驗需要外包與代做，都可以留言給我們，咱們一起學習共同進步哦！