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實驗介紹
【技術原理】
熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內后，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。細胞內活性氧的升高是細胞凋亡的標志之一。
【實驗流程】
Step1：制成單細胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細胞樣本無需進行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調整細胞密度
Step5：加入相應的熒光探針
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機檢測
注意事項
1、為保證所得結果的可靠性，每次實驗前應用標準熒光微球檢測儀器的變異系數；
2、每次應做陰性對照、陽性對照、質控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結果的影響降至最低；
3、細胞應保持良好的活性狀態(tài)，否則對結果影響較大。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內 | 常溫運輸 |
| 活細胞 | 樣本量：1*106個細胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內 | 常溫運輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內 | 常溫運輸 |
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