免疫表型
免疫表型分析可以作為鑒別各種白血病和淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)手段，輔助臨床評(píng)估療效和預(yù)后。不是所有的細(xì)胞都能通過(guò)免疫表型來(lái)判定，只有有特異表型標(biāo)志的細(xì)胞才能通過(guò)表型來(lái)判斷。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
免疫表型分析可以作為鑒別各種白血病和淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)手段，輔助臨床評(píng)估療效和預(yù)后。不是所有的細(xì)胞都能通過(guò)免疫表型來(lái)判定，只有有特異表型標(biāo)志的細(xì)胞才能通過(guò)表型來(lái)判斷。
【免疫表型】
免疫表型是通常所說(shuō)的白細(xì)胞分化標(biāo)志，即CD加上數(shù)字，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)300多種白細(xì)胞分化標(biāo)志。因?yàn)榧?xì)胞不同，所以每個(gè)細(xì)胞的標(biāo)志也會(huì)不同，就像不同的人有不同的面孔一樣。不同的免疫細(xì)胞表面有大量的抗原，可以作為不同分化階段免疫細(xì)胞的表面標(biāo)志物。
淋巴細(xì)胞亞群分析是檢測(cè)細(xì)胞免疫和體液免疫功能的重要指標(biāo)，它總體反應(yīng)機(jī)體當(dāng)前的免疫免疫功能、狀態(tài)和平衡水平，并可以輔助診斷某些疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、惡性腫瘤、血液病、變態(tài)反應(yīng)性疾病等，分析發(fā)病機(jī)制，觀察療效及檢測(cè)預(yù)后有重要意義。
【實(shí)驗(yàn)方法】
1、取20ul單克隆抗體與100μl抗凝血，共同混合置室溫20 min；
2、加溶血素1500μI，置室溫避光15 min，2500 r/min離心5 min；
3、棄上清，加1500μI PBS，混勻，2500 r/min離心5 min；
4、同上操作1次，上儀器檢測(cè)：以CD45-PerCP/SSC設(shè)門，觀察每群細(xì)胞免疫表型。
案例展示
圖 1. 淋巴細(xì)胞亞群的免疫表型
技術(shù)總結(jié)
1、標(biāo)本最好用EDTA抗凝，其次用肝素；
2、標(biāo)本要新鮮采集，不能發(fā)生凝血；
3、制備細(xì)胞懸液時(shí)，使用標(biāo)準(zhǔn)溶血?jiǎng)┮允辜t細(xì)胞充分溶解；
4、標(biāo)記后的細(xì)胞應(yīng)盡快上機(jī)檢測(cè)，最遲不能超過(guò)72h。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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