石蠟切片、冰凍切片
石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。 冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度，然后進(jìn)行切片的一種方法。制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，因而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
組織經(jīng)固定后，含有大量水分，使用乙醇從低濃度到高濃度將組織內(nèi)的水分逐漸置換出來(lái)，以利于透明劑和石蠟的進(jìn)入，這個(gè)過(guò)程稱為脫水。組織脫水后，必須經(jīng)過(guò)一種既能與乙醇相結(jié)合，又能溶解石蠟的溶劑，通過(guò)這種溶劑的媒介作用使石蠟浸入組織，這種溶劑使組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)，這個(gè)過(guò)程稱為透明。組織經(jīng)過(guò)脫水、透明后用石蠟作為支持劑浸入組織內(nèi)，使組織變硬并將組織包裹在內(nèi)，有利于切片，這個(gè)過(guò)程稱為浸蠟。浸蠟后的組織塊用石蠟包成塊，使組織達(dá)到一定的硬度和韌度有利于切片。
【實(shí)驗(yàn)流程】
案例展示
技術(shù)總結(jié)
【常見(jiàn)問(wèn)題】
1、切片上卷或皺起
切片刀角度過(guò)大或過(guò)小，調(diào)整角度以5°為宜。
2、切片有空洞及破碎不齊
切片時(shí)慢一點(diǎn)，輕削組織。
3、切片有褶皺
切片時(shí)對(duì)準(zhǔn)蠟塊表面輕輕哈氣。
【注意事項(xiàng)】
1、組織硬度較大，容易發(fā)生切片碎裂，需經(jīng)軟化或脫鈣；
2、攤片時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，組織中心易開(kāi)裂；
3、攤片時(shí)間過(guò)短，組織有褶皺，影響后續(xù)染色拍照；
4、特殊組織的切片，在后續(xù)染色過(guò)程中容易出現(xiàn)掉片的情況，比如皮膚、腦組織；
5、切片太厚，容易導(dǎo)致染色程度過(guò)深。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS 清洗干凈血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過(guò)2cmX2cmX0.5cm，固定時(shí)盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時(shí)長(zhǎng) | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對(duì)應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定 | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過(guò) 0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過(guò)半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測(cè)不到蛋白。 | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時(shí)間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板專用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個(gè)爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊。 | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對(duì)于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，并附帶說(shuō)明書(shū)，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計(jì)算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計(jì)算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計(jì)算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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