我們?cè)谂囵B(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，總是會(huì)遇到一些頭疼的事，比如細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，狀態(tài)看起來(lái)不夠好，傳代之后細(xì)胞越來(lái)越差等問(wèn)題。

先不要著急，細(xì)胞的修復(fù)能力比你想象中更強(qiáng)，它不是沒(méi)救了，只要有耐心，用點(diǎn)小技巧來(lái)給它做個(gè)美容，細(xì)胞狀態(tài)是可以慢慢恢復(fù)的。

那么如何做呢？小編現(xiàn)在就給你介紹一些辦法。

這個(gè)不僅僅是說(shuō)培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問(wèn)題。有些細(xì)胞有密度依賴(lài)性，數(shù)量多一點(diǎn)時(shí)比較好生長(zhǎng)，生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好，這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞，譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好，譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞，尤其是巨噬細(xì)胞，生長(zhǎng)速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且，巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的，如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果不好。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問(wèn)題。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：

首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml PBS洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的 PBS進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍，然后吸走。這時(shí)候再開(kāi)始正式的消化、吹打。

其次，把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。

然后，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)，如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞完美形態(tài)。其中要注意結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況,對(duì)于有密度依賴(lài)性的細(xì)胞，等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳傳代，反之亦然。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，如果細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中有較多死細(xì)胞或細(xì)胞碎片，可將細(xì)胞吹散后用離心管收集離心，離心后沉淀分為兩層，活細(xì)胞處于上層，死細(xì)胞和細(xì)胞碎片處于下層，呈白色。去上清，加入新鮮培養(yǎng)基將上層細(xì)胞輕輕吹打混勻（不要用力過(guò)猛，從而將細(xì)胞碎片吹散），再將細(xì)胞懸液接種至新的培養(yǎng)瓶，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

調(diào)整前

調(diào)整后

可以這樣說(shuō)，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否、狀態(tài)好與不好的至關(guān)重要的考驗(yàn)。我們經(jīng)常會(huì)遇到這樣的問(wèn)題，自己培養(yǎng)的細(xì)胞開(kāi)始幾代生長(zhǎng)狀態(tài)良好，可是傳代幾次之后細(xì)胞狀態(tài)就不行了，越來(lái)越差。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，可以非?？隙ǖ卣f(shuō)，細(xì)胞消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了，每一次消化都讓細(xì)胞受到較大損傷，所以越長(zhǎng)越差。

在消化的過(guò)程中，加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是每個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁較松，這一點(diǎn)往往容易被忽視。對(duì)于較難消化或?qū)σ让该舾械募?xì)胞，可以采用四步消化法，具體操作如下：

第一步：不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，（這是前奏，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類(lèi)盡量洗掉。）

第二步：加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來(lái)，再用培養(yǎng)基清洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，與后面胰酶消化過(guò)的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比觀察即可知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度。）

第三步：吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體，加入2mlPBS潤(rùn)洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶于干凈EP管備用，加入新培養(yǎng)基吹打2-3遍后吸取懸液于離心管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合（也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以便與后面及前面的做對(duì)比）。

第四步：把第三步吸出來(lái)的胰酶重新加入瓶?jī)?nèi)，繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞（也可以用新的胰酶），繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開(kāi)來(lái)的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打，懸液傳入新瓶培養(yǎng)。

將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷之外，還有一個(gè)更重要的作用就是，可以最大程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài)，不成片不連體。

以上就是關(guān)于細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、狀態(tài)看起來(lái)不夠好、傳代之后細(xì)胞越來(lái)越差的解決方法，是不是已經(jīng)幫您弄清楚了呢？

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