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   細(xì)胞增殖檢測(cè)常用方法MTT法和CCK8法詳細(xì)介紹由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享。普拉特澤旗下的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)根據(jù)多年來(lái)承接的細(xì)胞增殖檢測(cè)外包實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，給大家介紹兩個(gè)我們?cè)跈z測(cè)細(xì)胞增殖時(shí)時(shí)最常用的實(shí)驗(yàn)方法——MTT法和CCK8法，同學(xué)們打起精神來(lái)，這兩種檢測(cè)方法應(yīng)用廣泛值得學(xué)習(xí)哦。如果有需要用MTT和CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)外包的需求，請(qǐng)關(guān)注我們哦。

   
   首先我們來(lái)看看細(xì)胞增殖檢測(cè)中的MTT法：
          MTT法檢測(cè)原理：MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

局限性： 由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲瓚的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。

          MTT檢測(cè)法注意事項(xiàng)：

   1、MTT法只能用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力，但不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi)。

   2、MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/mL保存在-20℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里，用的時(shí)候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加，尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。

   3、MTT有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件最好帶那種透明的薄膜手套.配成的MTT需要無(wú)菌，MTT對(duì)菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒(méi)有關(guān)系，畢竟時(shí)間較短，或者可以把操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉。

   4、配制MTT時(shí)用PBS溶解,也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。

   那現(xiàn)在我們?cè)賮?lái)來(lái)看看細(xì)胞增殖檢測(cè)中的CCK-8法：

          CCK-8法檢測(cè)原理：CCK-8檢測(cè)實(shí)際是基于CCK-8試劑盒的細(xì)胞檢測(cè)方法。原理和MTT相似，都是由于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜，不同之處在于CCK-8法生成的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）是水溶的。故較MTT法減少了吸出培養(yǎng)液在加入有機(jī)溶劑溶解這一步，也算是MTT法的優(yōu)化。相對(duì)與MTT ,CCK8試劑盒使用方便，即開(kāi)即用；減少了實(shí)驗(yàn)過(guò)程重復(fù)性；減小了對(duì)細(xì)胞的毒性。另一方面，較于MTT法實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)也會(huì)貴不少。

   CCK-8法注意事項(xiàng)：

  1. CCK-8的培養(yǎng)時(shí)間一般為1-4小時(shí)，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度，根據(jù)細(xì)胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8的最佳反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的最佳時(shí)間為準(zhǔn)。

  2. 使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)問(wèn)題。一方面，由于 96 孔板周?chē)蝗ψ钊菀渍舭l(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

  3. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑 (例如一些抗氧化劑) 會(huì)干擾檢測(cè)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

  4. 加入藥物中如含有金屬，對(duì)CCK-8顯色有影響。終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會(huì)100%抑制。

  5. 培養(yǎng)基中的酚紅不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

  6. 本產(chǎn)品可以檢測(cè) ，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。向 100 μL 培養(yǎng)液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培養(yǎng) 1-4 小時(shí)或過(guò)夜。

  7. CCK-8 試劑對(duì)細(xì)胞的毒性非常低。它和活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶持續(xù)反應(yīng)使溶液顏色不斷加深，OD 值不斷增加 (注: 活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶是持續(xù)產(chǎn)生的) 。

  8. 要測(cè)定細(xì)胞的具體數(shù)量，建議同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  9. 建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。

   好啦，那這兩個(gè)關(guān)于細(xì)胞增殖檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法同學(xué)們看懂了嗎？MTT法和CCK8法更想學(xué)哪個(gè)呢？小編的建議是成年人的世界不需要選擇，全都要！如果您不只有學(xué)習(xí)的需求，還有細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)外包的需求，請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)普拉特澤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，您科研路上一個(gè)靠譜兒的大兄弟！