Chip-seq實驗原理簡圖版
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是Chip-seq實驗原理簡圖版
ChIP-seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)是一種用于研究蛋白質與DNA相互作用的高通量測序技術。而普拉特澤生物——分子檢測平臺也非常重視這一點,為廣大科研人員提供Chip實驗外包服務,同時也繪制了各種chip實驗流程圖片,分享給大家一起共勉!
聲明:以下圖片繪制均來源網(wǎng)絡~ChIP-seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)它通常用于研究轉錄因子、組蛋白修飾、染色質結構等與基因表達調控相關的生物學問題。
ChIP-seq的基本原理是:利用特定的抗體將感興趣的蛋白質與DNA結合的復合物進行免疫共沉淀,然后通過高通量測序技術對免疫共沉淀的DNA進行測序和分析,以確定蛋白質與DNA結合的位置和數(shù)量。
具體步驟如下:
1.利用甲醛固定蛋白質和DNA
將細胞或組織樣品與甲醛等交聯(lián)劑進行交聯(lián),使得蛋白質與DNA之間形成穩(wěn)定的交聯(lián)復合物。
2.利用超聲波/限制性酶切割DNA
將交聯(lián)后的細胞或組織樣品進行裂解,使得蛋白質-DNA復合物被釋放出來。
3.免疫共沉淀
使用特定的抗體對感興趣的蛋白質進行免疫共沉淀,將與蛋白質結合的DNA片段一同沉淀下來。
4.反交聯(lián)
將免疫共沉淀的樣品進行反交聯(lián),使得蛋白質與DNA之間的交聯(lián)斷開,同時將DNA片段從蛋白質中解離出來。
5.DNA純化
將反交聯(lián)后的DNA進行純化和富集,去除雜質和不需要的DNA片段。
6.文庫構建
將純化后的DNA片段進行文庫構建,包括DNA片段的修飾、適配體的連接、PCR擴增等步驟。
7.高通量測序
對構建好的文庫進行高通量測序,得到大量的短讀序列。
8.數(shù)據(jù)分析
對測序數(shù)據(jù)進行處理和分析,包括數(shù)據(jù)分析對測序數(shù)據(jù)進行處理和分析、序列比對、峰值識別、富集分析、差異分析等步驟,以及它們在基因表達調控中的功能和機制。
All in all,chip-seq技術的原理是通過免疫共沉淀和高通量測序技術,對蛋白質與DNA相互作用的復合物進行定位和分析,從而揭示基因表達調控的分子機制和生物學意義。
這是一項超適合轉錄因子研究的技術?。?!
好,今天關于Chip-seq實驗原理簡圖
就說到這里
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