非酒精性脂肪肝NAFLD模型常見問題及解決方案
2025-04-14 16:44:55
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
非酒精性脂肪肝NAFLD模型常見問題及解決方案由普拉特澤生物技術(shù)為大家總結(jié)分享。前面我們學(xué)習(xí)了全面了解非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝（NAFLD）診斷與研究全攻略、揭秘非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型構(gòu)建以及非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型關(guān)鍵指標(biāo)檢測(cè)指南，可以點(diǎn)擊標(biāo)題直接傳送回去學(xué)習(xí)的哦。普拉特澤生物動(dòng)物檢測(cè)平臺(tái)承接非酒精性脂肪肝模型實(shí)驗(yàn)外包上百例，早就為大家把實(shí)驗(yàn)過程中要踩的雷、吃的虧幫大家吃完了，現(xiàn)在我們就來看看，實(shí)驗(yàn)過程中還有哪些常見的問題和解決方法吧！
前期回顧：
全面了解非酒精性脂肪肝：模型指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)
非酒精性脂肪肝（NAFLD）診斷與研究全攻略：從臨床指標(biāo)到實(shí)驗(yàn)方案
揭秘非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型構(gòu)建（這8個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)決定研究成?。?/span>
非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型關(guān)鍵指標(biāo)檢測(cè)指南
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)動(dòng)物模型是研究這一全球高發(fā)疾病的重要工具，但在實(shí)際建模過程中，研究人員常會(huì)遇到各種棘手問題。本文將系統(tǒng)梳理NAFLD動(dòng)物模型構(gòu)建中的7大常見問題，并提供經(jīng)過驗(yàn)證的解決方案，幫助您提高建模成功率，獲得可靠研究數(shù)據(jù)。
一、造模失?。簞?dòng)物未出現(xiàn)預(yù)期表型
1. 脂肪變性不明顯
●可能原因：
⒈動(dòng)物品系選擇不當(dāng)（如BALB/c對(duì)高脂飲食抵抗）
⒉飼料儲(chǔ)存不當(dāng)導(dǎo)致脂質(zhì)氧化失效
⒊造模時(shí)間不足（高脂飲食需至少12周）
●解決方案：
→選用敏感品系（推薦C57BL/6雄性）
→飼料-20℃保存，開封后2周內(nèi)用完
→延長(zhǎng)造模至16-24周，或改用MCD飲食
2. 炎癥反應(yīng)缺失
常見問題：
▲HFD模型僅產(chǎn)生脂肪變性無炎癥
▲炎癥評(píng)分(NAS)低于3分
改進(jìn)措施：
▲添加1%膽固醇至HFD
▲改用HFHFrHC（高脂高果糖高膽固醇）飲食
▲結(jié)合低劑量CCL4（0.2ml/kg，每周2次）
二、模型不穩(wěn)定的5大因素及對(duì)策
1. 動(dòng)物個(gè)體差異大
表現(xiàn)：同組動(dòng)物肝臟TG含量差異>30%
控制方法：
嚴(yán)格統(tǒng)一周齡（±3天）
●單籠飼養(yǎng)避免飲食量差異
●預(yù)篩選基礎(chǔ)代謝指標(biāo)
2. 季節(jié)性波動(dòng)
●影響：冬季建模效率降低20-30%
●應(yīng)對(duì)：
維持恒定溫濕度（22±1℃，50-60%）
固定光照周期（12h/12h）
避免頻繁更換飼料批次
3. 操作不規(guī)范
典型錯(cuò)誤：
●非禁食狀態(tài)取材
●肝臟取樣部位不統(tǒng)一
標(biāo)準(zhǔn)化流程：
●統(tǒng)一禁食6小時(shí)后取材
●固定取肝左葉相同位置
●多人操作時(shí)進(jìn)行技術(shù)校準(zhǔn)
三、病理評(píng)估中的3大陷阱
1. 評(píng)分主觀性
問題：不同病理學(xué)家NAS評(píng)分差異達(dá)2分
解決方案：
▲采用數(shù)字化病理分析系統(tǒng)
▲建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)圖譜
▲至少2人雙盲獨(dú)立評(píng)分
2. 染色質(zhì)量不穩(wěn)定
常見問題：
天狼星紅染色對(duì)比度差
油紅O染色背景深
優(yōu)化方案：
天狼星紅：調(diào)節(jié)pH至2.0-2.5
油紅O：使用新鮮配制異丙醇溶液
增設(shè)陽性和陰性對(duì)照
3. 纖維化評(píng)估不足
誤區(qū)：僅依賴H&E染色判斷
全面評(píng)估：
天狼星紅偏振光觀察Ⅰ/Ⅲ型膠原
羥脯氨酸定量檢測(cè)
α-SMA免疫組化標(biāo)記活化的HSCs
四、分子機(jī)制研究的4大挑戰(zhàn)
1. RNA降解
預(yù)防措施：
離體后5分鐘內(nèi)投入液氮
使用RNAlater保存
避免反復(fù)凍融（分裝保存）
2. 蛋白提取困難
脂肪肝特殊處理：
▲增加裂解液體積（1:20組織重量比）
▲超聲破碎前用濾紙吸除表面脂質(zhì)
▲添加蛋白酶抑制劑混合物
3. 數(shù)據(jù)變異大
改進(jìn)方法：
▲設(shè)內(nèi)參基因/蛋白（推薦β-actin+GAPDH）
▲每個(gè)樣本3次技術(shù)重復(fù)
▲使用qPCR數(shù)據(jù)分析軟件（如qBase+）
4. 通路驗(yàn)證不足
全面策略：
▲關(guān)鍵蛋白Western blot驗(yàn)證
▲免疫熒光共定位分析
▲功能性挽救實(shí)驗(yàn)（激動(dòng)劑/抑制劑）
五、特殊模型構(gòu)建的3個(gè)難點(diǎn)
1. NASH向纖維化進(jìn)展
加速方案：
→HFHFrHC飲食+0.35mg/kg CCL4（每周1次）
→DIAMOND小鼠模型（24周自發(fā)纖維化）
→高脂飲食結(jié)合STZ（糖尿病相關(guān)纖維化）
2. 性別差異處理
注意事項(xiàng)：
①雌性需去卵巢消除雌激素干擾
②雄性更易造模（優(yōu)先選擇）
③如需雌性模型，需延長(zhǎng)造模時(shí)間30%
3. 老齡動(dòng)物模型
特殊處理：
①使用12月齡以上小鼠
②降低飲食脂肪含量（從60%降至45%）
③密切監(jiān)測(cè)生存率（可能需提前取材）
六、數(shù)據(jù)發(fā)表的5個(gè)必備驗(yàn)證
1. 代謝表型驗(yàn)證
必測(cè)指標(biāo)：
口服糖耐量(OGTT)
胰島素耐量(ITT)
血清脂質(zhì)譜（TG/TC/HDL/LDL）
2. 組織學(xué)驗(yàn)證
金標(biāo)準(zhǔn)組合：
H&E染色（NAS評(píng)分）
天狼星紅（纖維化分期）
油紅O（脂肪變性定量）
3. 分子機(jī)制驗(yàn)證
多層次證據(jù)：
mRNA水平（qPCR）
蛋白水平（Western blot/IHC）
功能性實(shí)驗(yàn)（基因敲除/過表達(dá)）
4. 臨床相關(guān)性分析
⑴轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)指標(biāo)：
血清CK-18片段
FIB-4指數(shù)計(jì)算
肝臟硬度檢測(cè)（如FibroScan）
5. 方法學(xué)報(bào)告
必含信息：
動(dòng)物品系/周齡/性別
飼料配方/供應(yīng)商
取材具體時(shí)間點(diǎn)/條件
七、前沿解決方案展望
1. 類器官技術(shù)
應(yīng)用：
⑴患者特異性NAFLD模型
⑵藥物敏感性測(cè)試
⑶疾病機(jī)制研究
2. 多組學(xué)整合
新策略：
轉(zhuǎn)錄組+代謝組聯(lián)合分析
微生物組+肝臟基因表達(dá)關(guān)聯(lián)
單細(xì)胞測(cè)序解析異質(zhì)性
3. 人工智能輔助
技術(shù)革新：
①數(shù)字病理自動(dòng)評(píng)分
②實(shí)驗(yàn)條件智能優(yōu)化
③數(shù)據(jù)偏差自動(dòng)檢測(cè)
結(jié)語：成功構(gòu)建NAFLD模型的5大黃金法則
⒈嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化：從動(dòng)物采購(gòu)到數(shù)據(jù)分析全流程SOP
⒉多維度驗(yàn)證：代謝-病理-分子三位一體評(píng)估
⒊動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)：設(shè)立多個(gè)時(shí)間點(diǎn)捕捉疾病進(jìn)展
⒋質(zhì)量控制：每批實(shí)驗(yàn)設(shè)立陽性和陰性對(duì)照
⒌臨床關(guān)聯(lián)：選擇與人類疾病高度相似的模型系統(tǒng)
掌握這些問題的解決方案，您將能夠建立穩(wěn)定可靠的NAFLD動(dòng)物模型，為深入研究疾病機(jī)制和開發(fā)新型治療策略提供堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)！
欲獲得更多的信息和幫助，可通過以下方式聯(lián)系：
流式檢測(cè)|病理檢測(cè)|動(dòng)物模型|實(shí)驗(yàn)服務(wù)|分子操作|免疫相關(guān)檢測(cè)
免費(fèi)熱線：18570028002
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號(hào)
湘公網(wǎng)安備