彗星實驗/單細胞凝膠電泳實驗操作步驟【附視頻教程】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
彗星實驗操作步驟由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享,文末附有彗星實驗操作視頻教程供大家學(xué)習(xí)。普拉特澤生物細胞實驗平臺專業(yè)承接彗星實驗代做、外包服務(wù),彗星實驗作為細胞平臺的常規(guī)實驗,我們自己總寫了一套專業(yè)高質(zhì)的操作步驟,在此分享給大家,歡迎交流分享哦:
彗星實驗第一步:分離制備單細胞懸液:
(1)體外培養(yǎng)的細胞株:用胰酶消化,最后用PBS懸浮吹打成單細胞懸液,細胞要計數(shù),具體的量我前邊已經(jīng)說過。
(2)體內(nèi)臟器細胞:處死動物,取出臟器,于Hanks’液中制備成單個細胞懸液。
彗星實驗第二步:膠板制備:
(1)取100μl于45℃水浴中保溫的0.5%NMA,鋪于磨沙載玻片上,形成底膠。蓋玻片推勻,不能有氣泡,4度凝固5至8分鐘。
(2)水平取下蓋片,取100μl于37℃水浴中保溫的0.5%LMA與20μl細胞懸液(約400彗星實驗)。
第三步:細胞裂解與電泳:
(1)將制備好的膠板去掉蓋玻片后,浸于4℃預(yù)冷的細胞裂解液中,在4℃下裂解2.5到3小時。
(2)取出膠板,用雙蒸水浸沒漂洗后放入電泳槽中,浸泡在4℃預(yù)冷的電泳液中解旋20分鐘。
(3)玻片水平放置陽極端附近,4℃電泳20到25分鐘(25V,300mA)??稍陔娪静壑車颖鶋K以保持低溫。
彗星實驗第四步:中和與染色:
(1)電泳結(jié)束,將膠板浸泡于中和液中,每次10分鐘,共中和3次,每次要更換中和液。最后晾干。
(2)取出膠板,置于染色缸中,在2μg/ml的EB染色液中,暗處染色5到10分鐘。
(3)蒸餾水漂洗2次,每次5分鐘。
好啦,那實驗步驟我們就說到這里啦,視頻教程請點擊:《彗星實驗理論+實操》 。但是要提醒大家,不同的樣本和情況實驗步驟要相應(yīng)的進行調(diào)整哦,如果有把握不準的歡迎給客服留言,技術(shù)會耐心給大家根據(jù)樣本情況調(diào)整實驗步驟,快來留言吧!