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  大家好呀，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是彗星實驗（單細(xì)胞凝膠電泳實驗）操作時的注意事項，文末附上彗星實驗理論操作視頻教程供大家學(xué)習(xí)。彗星實驗是一種在單細(xì)胞水平檢測DNA 損傷程度的方法，作為普拉特澤生物細(xì)胞實驗平臺的常規(guī)實驗，我們承接的彗星實驗外包積累了超多種類細(xì)胞樣本的案例，歡迎大家留言咨詢領(lǐng)取案例。

  那么話不多說，現(xiàn)在我們就來看看彗星實驗的操作中有哪些注意事項吧！

      1、細(xì)胞一定要消化成單個的，如果待測的細(xì)胞是懸浮生長的，或者形狀是圓形的，可以直接用細(xì)胞刮收細(xì)胞做，如果細(xì)胞是非圓形的，例如成纖維細(xì)胞等，一定要用胰酶消化，使之成圓形，然后才可做實驗。很多做彗星實驗總是出不來結(jié)果的，可以考慮下是否是這方面的原因。

  2、細(xì)胞裂解：裂解條件也是一個關(guān)鍵變量，可能會干擾特定類型的DNA修飾(某些DNA烷基化和堿基內(nèi)收)導(dǎo)致的鏈斷裂。因此，建議在實驗中對所有玻片的裂解條件盡可能保持恒定。準(zhǔn)備好后，應(yīng)在約2-8攝氏度的弱光條件下(如黃光(或防光)，將載玻片浸入冷凍溶解液中至少1小時(或過夜)，以避免暴露在可能含有紫外線成分的白光下。在此潛伏期之后，在堿液展開步驟之前，應(yīng)沖洗載玻片以除去殘留的洗滌劑和鹽。這可以用純凈水、中和緩沖液或磷酸鹽緩沖液來完成。

  3、玻片準(zhǔn)備：單細(xì)胞懸液制備后，應(yīng)盡快(最好在1小時內(nèi))制備載玻片，但動物死亡與載玻片制備之間的溫度和時間應(yīng)嚴(yán)格控制，并在實驗室條件下進(jìn)行驗證。

  4、電泳時，電流與電壓強(qiáng)度在每次實驗時要恒定，這樣出來的慧尾才有分析價值，將載玻片隨機(jī)放置在含有足夠電泳溶液的潛電泳裝置的平臺上，使載玻片表面完全覆蓋(每次覆蓋的深度也應(yīng)一致)。

  5、掉膠的問題：蓋玻片最好兩面都涂上剝離硅烷(挺便宜的一大瓶，但是有毒)，這樣會好很多。

  6、使用組織進(jìn)行彗星試驗時，需注意細(xì)胞制備需全程在冰上進(jìn)行，且保證在1 h內(nèi)完成鋪片。

  7、電泳膠使用時需提前水浴融化，禁用微波，清洗玻片時注意不要直接將液體傾倒至膠面，防止脫膠。

  8、測量方法：彗星應(yīng)該使用自動化或半自動化的圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量評分。用合適的熒光染色劑對載玻片進(jìn)行染色，并在配備有超熒光和適當(dāng)檢測器的顯微鏡或數(shù)碼相機(jī)上進(jìn)行適當(dāng)放大(如200x)的測量。

  好啦，那彗星實驗（單細(xì)胞凝膠電泳）操作的注意事項咱們就講完啦，視頻教程點擊《彗星實驗 理論+實操》，如果您也想學(xué)習(xí)彗星實驗或者對彗星實驗感興趣有不同的意見和想法，歡迎留言交流哦，下篇跟大家一起盤一盤，彗星實驗中的常見問題,,我們下期見~