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        大家好，今天跟大家一起學(xué)習的是石蠟切片的詳細制作步驟，石蠟切片的制作方法由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享。石蠟切片的制作好壞直接影響后期的樣本觀察或檢測。普拉特澤生物病理實驗平臺在承接大量的石蠟切片外包服務(wù)后，總結(jié)出自己的操作經(jīng)驗，旨在教會病理小白們學(xué)會、學(xué)精石蠟切片的制作。

        上期我們在石蠟切片的實驗介紹中簡單過了一遍操作步驟，主要是：取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片?，F(xiàn)在我們就來一個一個看：

        石蠟切片制作第一步：取材

        應(yīng)根據(jù)要求選取材料來源及部位。材料必須新鮮，擱置時間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性，導(dǎo)致細胞自溶及細菌的滋生，而不能反映組織活體時的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

        石蠟切片制作第二步：固定

        用適當?shù)幕瘜W(xué)藥液——固定液浸漬切成小塊的新鮮材料，迅速凝固或沉淀細胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細胞的一切代謝過程、防止細胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化，有利于切片的進行，而且也有媒浸作用，有利于組織著色。固定液的種類很多，其對組織的硬化收縮程度以及組織內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等物質(zhì)的作用各不相同。10%福爾馬林（4%甲醛）或10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液，不僅適用于常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，還可以用于組織學(xué)有關(guān)的其他技術(shù)的切片染色。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以從1小時至數(shù)天，通常為1小時至24小時。

        石蠟切片制作第三步：洗滌與脫水

        固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會影響后期的染色效果。該步驟稱作洗滌多數(shù)用流水沖洗；使用含有苦味酸的固定液固定的則需用酒精多次浸洗；使用酒精或酒精混合液固定的組織，則不必洗滌，可直接進行脫水。固定后或洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，若不除去水分則無法進行以后的透明、浸蠟與包埋處理，原因在于透明劑多數(shù)是苯類，苯類和石蠟均不能與水相溶合，水分不能脫盡，苯類無法浸入。酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合，又能與透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行，通常從30%或50%酒精開始，經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每次時間為1～數(shù)小時，如不能及時進行各級脫水，材料可以放在70%酒精中保存，因高濃度酒精易使組織收縮硬化，不宜處理過久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陸環(huán)等也可做脫水劑。

        石蠟切片制作第四步：透明

        純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在這類媒浸液中浸漬，出現(xiàn)透明狀態(tài)，此液即稱透明劑，透明劑浸漬過程稱透明。常用的透明劑有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各種透明劑均是石蠟的溶劑。通常組織先經(jīng)純酒精和透明劑各半的混合液浸漬1～2小時，再轉(zhuǎn)入純透明劑中浸漬。透明劑的浸漬時間則要根據(jù)組織材料不同的組織類型而定，如果透明時間過短，則透明不徹底，石蠟難于浸入組織；透明時間過長，則組織硬化變脆，就不易切出完整切片，最長為數(shù)小時。

        石蠟切片制作第五步：浸蠟與包埋

        用石蠟取代透明劑，使石蠟浸入組織而起支持作用。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1～2小時，浸蠟應(yīng)在高于石蠟熔點3℃左右的溫箱中進行，以利石蠟浸入組織內(nèi)。浸蠟后的組織材料塊放在裝有蠟液的容器中（擺好在蠟中的位置），待蠟液表層凝固即迅速放入冷水中冷卻，即做成含有組織塊的蠟塊。容器可用光亮且厚的紙折疊成紙盒或金屬包埋框盒。如果包埋的組織塊數(shù)量多，應(yīng)進行編號，以免差錯。石蠟熔化后應(yīng)在蠟箱內(nèi)過濾后使用，以免因含雜質(zhì)而影響切片質(zhì)量，且可能損傷切片刀。通常石蠟采用熔點為56～58℃或60～62℃兩種，可根據(jù)季節(jié)及操作環(huán)境溫度來選用。

        石蠟切片制作第六步：切片

        包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺，以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于小木塊上，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊切面與切片刀刃平行，旋緊。切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質(zhì)量，可用熱水或冷水等方法適當改變蠟塊硬度。通常切片厚度為4～7微米，切出一片接一片的蠟帶，用毛筆輕托輕放在紙上。

        石蠟切片制作第七步：貼片與烤片

        用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上，以免在以后的脫蠟、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑是蛋白甘油。首先在潔凈的載玻片上涂抹薄層蛋白甘油，再將一定長度蠟帶（連續(xù)切片）或用刀片斷開成單個蠟片于溫水（45℃左右）中展平后，撈至玻片上鋪正，或直接滴兩滴蒸餾水于載玻片上，再把蠟片放于水滴上，略加溫使蠟片鋪展，最后用濾紙吸除多余水分，將載玻片放入45℃溫箱中干燥，也可在37℃溫箱中干燥，但需適當延長時間。

        好啦，那么石蠟切片的詳細制流程我們就講完啦，這么詳細大家應(yīng)該都學(xué)會了吧，復(fù)雜而簡單的操作步驟如果您覺得麻煩的話可以交給我們普拉特澤生物的病理平臺技術(shù)哦，有更多不懂得也歡迎留言，一定竭誠回復(fù)~