植物組織樣本DNA提取步驟【收藏篇】
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
植物組織DNA提取步驟由普拉特澤生物技術(shù)分享,DNA全稱是脫氧核糖核酸,普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)為大家提供各種分子檢測(cè)外包實(shí)驗(yàn),積累了大量實(shí)操經(jīng)驗(yàn),本文就跟大家分享植物組織DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟~
一、植物組織DNA提取儀器與設(shè)計(jì)準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)儀器:高速離心機(jī);烘箱;冰箱;水浴鍋;高壓滅菌鍋;Nanodrop。
實(shí)驗(yàn)試劑:玻璃珠,十二烷基磺酸鈉(SDS);三羥甲基氨基甲烷(Tris);乙二胺四乙酸(EDTA);氯化鈉;苯酚;氯仿;無(wú)水乙醇等。
二、植物組織DNA提取步驟
植物組織的DNA提取通常采用機(jī)械研磨的方法破碎植物的組織和細(xì)胞,由于植物細(xì)胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對(duì) DNA 的抽提產(chǎn)生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強(qiáng)還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并減少研磨過(guò)程中各種酶類的作用。詳細(xì)操作步驟如下:
1、SDS 提取緩沖液在 65℃水浴中預(yù)熱。
2、將葉片置于 1.5ml 離心管中,液氮速凍,組織研磨器打樣。
3、加入 700 ml 的 SDS 提取緩沖液,渦旋搖勻。
4、置于 65℃的水浴中,每隔 10 min 輕輕搖動(dòng),30 min 后取出。5.加入 200 ml KAc 溶液,搖勻,放入-20℃冰箱 30 min。
5、10000 rpm 離心 5 min,上清移至新離心管中,12000 rpm 離心 5 min。
6、上清移至新離心管中,加入 700 ml 異丙醇, -20℃冰箱 30 min。
7、10000 rpm 離心 5 min,棄上清,加入 500 ml 70%乙醇漂洗。
8、棄液體,晾干。
9、DNA 純度與濃度測(cè)定 (使用 nanodrop)。
DNA 純度:DNA 的 OD260/OD280 一般為 1.8 左右。
OD260/OD280 ? 1.8:說(shuō)明較純;
OD260/OD280 > 1.8:說(shuō)明可能有 RNA 污染;
OD260/OD280 < 1.8:說(shuō)明可能有蛋白質(zhì)污染。
三、植物組織DNA提取注意
1. 葉片磨得越細(xì)越好。
2. 注意移液器的正確使用。
3. 由于植物細(xì)胞中含有大量的 DNA 酶,因此,除在抽提液中加入 EDTA 抑制酶的活性外,第一步的操作應(yīng)迅速,以免組織解凍,導(dǎo)致細(xì)胞裂解,釋放出 DNA 酶,使 DNA 降解。
好啦,那植物組織DNA提取步驟就講完啦,如果您還有其他的問(wèn)題或有分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)外包的需求歡迎隨時(shí)聯(lián)系普拉特澤生物~