細(xì)胞養(yǎng)不好,擴(kuò)培、轉(zhuǎn)染、藥篩啥啥做不好!
來(lái)源/作者:普拉特澤生物-醫(yī)學(xué)整體課題外包
當(dāng)你被老板逼著養(yǎng)一個(gè)從沒(méi)養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞,不知道該選擇什么培養(yǎng)基。這個(gè)時(shí)候:
實(shí)驗(yàn)室里天天養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的大師兄呵呵一笑脫口而出:DMEM高糖+20%FBS!
一直被原代細(xì)胞折磨的師姐不屑一顧:未必我F12不配擁有姓名???
小師妹小聲的弱弱支招:要不去Invitrogene或Sigma的網(wǎng)站查查推薦的培養(yǎng)基?
...
我:我的細(xì)胞誰(shuí)都沒(méi)養(yǎng)過(guò),我可是要著手建立一種全新細(xì)胞培養(yǎng)體系的人!
這種時(shí)候小朋友們要一起記?。?/span>
?沒(méi)有什么培養(yǎng)條件是絕對(duì)正確的!
?沒(méi)有什么細(xì)胞是咱養(yǎng)不活的!
?參考文獻(xiàn)沒(méi)有那就不參考了!
?反正文獻(xiàn)也不一定是對(duì)的!
?Ging!
各種細(xì)胞培養(yǎng)基的比較:
培養(yǎng)基類型 | 組成成分 | 應(yīng)用范圍 | 適用細(xì)胞 |
MEM培養(yǎng)基 | 僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和 8種維生素。 | 適于各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng) | HeLa、BHK-21、293T、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細(xì)胞、原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞等 |
MEM培養(yǎng)基成分明細(xì): L-精氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、硝酸鐵、硫酸鎂、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉;D-葡萄糖 | |||
DMEM培養(yǎng)基 | 與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素增加了4倍,同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉 | DMEM高糖型:應(yīng)用于生長(zhǎng)快、粘附性低的細(xì)胞、雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞、克隆細(xì)胞、 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞、原代病毒宿主細(xì)胞、單一細(xì)胞。 | 原代成纖維細(xì)胞、 神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、 平滑肌細(xì)胞、 |
DMEM低糖:適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。 | |||
DMEM培養(yǎng)基成分表: 甘氨酸、L-精氨酸、L-胱氨酸、L-組氨酸鹽酸鹽、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、硝酸鐵、硫酸鎂、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉;D-葡萄糖 | |||
RPMI1640 | 含有還原劑谷胱甘肽、高濃度的維生素、生物素、 維生素B12 以及 PABA | 尤其適用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng) | HeLa 、Jurkat、 MCF-7 、PC12 、PBMC 、星形膠質(zhì)細(xì)胞、癌細(xì)胞等 |
RPMI1640培養(yǎng)基成分: 甘氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-羥脯氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;生物素、維生素B12、氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;硝酸鈣、硫酸鎂、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉;D-葡萄糖、谷胱甘肽 | |||
DMEM/F-12 | DMEM 培養(yǎng)基和 Ham's F–12 培養(yǎng)基的 1:1混合物 | 1.廣泛用于支持多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng);2.無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ); | MDCK、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、人內(nèi)皮細(xì)胞、大鼠成纖維細(xì)胞等 |
DMEM/F-12培養(yǎng)基成分: 甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;生物素、維生素B12、氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、硫酸銅 、硝酸鐵、硫酸鎂、硫酸鎂、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉、硫酸鋅 ;D-葡萄糖、次黃嘌呤鈉、亞油酸、硫辛酸、腐胺、丙酮酸鈉、胸苷 | |||
Ham's F-12 | 含有一些傳統(tǒng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基沒(méi)有的成分,如腐胺、次黃嘌呤、胸苷、鋅等 | 1.低血清含量下時(shí),特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng); | 大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等 |
Ham's F-12培養(yǎng)基成分: 甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸鹽酸鹽、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;生物素、維生素B12、氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、硫酸銅 、硫酸鐵、氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉、磷酸二氫鈉、硫酸鋅;D-葡萄糖、次黃嘌呤鈉、亞油酸、硫辛酸、腐胺、丙酮酸鈉、胸苷 | |||
IMDM | 在DMEM 培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、 HEPES 、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素,并用硝酸鉀代替了硝酸鐵 | 非常適合于快速增殖,高密度細(xì)胞培養(yǎng) | Jurkat、COS-7 、巨噬細(xì)胞等 |
IMDM培養(yǎng)基成分: 甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;生物素、維生素B12、氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、硫酸鎂、氯化鉀、硝酸鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉、亞硒酸鈉;D-葡萄糖、HEPES、丙酮酸鈉 | |||
Leibovitz's | 不含用于CO2平衡環(huán)境的碳酸鹽緩沖系統(tǒng),而是用磷酸鹽、 L-精氨酸、 L-組氨酸和 L-半胱氨酸作為緩沖劑。同時(shí),用 D-半乳糖和丙酮酸鈉代替D-葡萄糖以防止酸性代謝副產(chǎn)物乳酸的形成 | 適用于非CO2 平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng) | HEP-2 猴腎臟細(xì)胞、胚胎和成人組織的原代組織塊細(xì)胞培養(yǎng)等 |
Leibovitz's L-15培養(yǎng)基成分: 甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸、L-谷氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸;氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、硫胺鹽酸鹽、肌醇;氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂、氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、磷酸二氫鈉;D+ 半乳糖、丙酮酸鈉 |
附:
一、常見(jiàn)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件:
1.接種濃度5×10*8個(gè)細(xì)胞/L;
2.培養(yǎng)基:MEM或DMEM,胎牛血清濃度:10%-80%;
3.37℃,5%CO2培養(yǎng)箱;
4.起始培養(yǎng)減少震蕩,防止貼壁細(xì)胞脫落。
二、常見(jiàn)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)條件:
1.原代培養(yǎng)時(shí)盡量去紅;
2.短期培養(yǎng)可選擇添加10%胎牛血清的RPMI 1640;長(zhǎng)期培養(yǎng)淋巴細(xì)胞時(shí),要加入細(xì)胞因子;
3.37℃,5%CO2培養(yǎng)箱;
4.每隔3天進(jìn)行半量換液。
END