
什么是OD值: 為什么可以用OD600檢測(cè)菌液濃度?
2025-07-07 18:25:05
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
Question: 為什么可以用OD600檢測(cè)菌液濃度?(普拉特澤生物提供長(zhǎng)期穩(wěn)定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù))
答:
OD值是“Optical Density”(光密度)的縮寫,用于表示被檢測(cè)物吸收光的程度,通常用分光光度計(jì)來(lái)測(cè)量OD值,具體是如何檢測(cè)的呢,比如說(shuō)你有一束手電筒的光,光通過(guò)一個(gè)透明的瓶子(樣品池),瓶子里裝了不同的液體。如果液體很清澈,大部分光都能透過(guò),檢測(cè)器測(cè)到的光就多;如果液體很渾濁,光被吸收得就多,檢測(cè)器測(cè)到的光就少。分光光度計(jì)就是通過(guò)測(cè)量這種光的透過(guò)和吸收,來(lái)計(jì)算OD值,從而了解樣品的性質(zhì)。
OD值與吸光度的關(guān)系
在光譜分析中,經(jīng)常用到兩個(gè)概念:吸光度和透光率。
吸光度(Absorbance,簡(jiǎn)稱A或Abs)表示光線通過(guò)樣品時(shí)被吸收的程度。
透光率(Transmittance,簡(jiǎn)稱T或Tra)表示光線通過(guò)樣品后剩余的光強(qiáng)度與原始光強(qiáng)度的比例,即T = P/P0,其中P是透過(guò)樣品的光強(qiáng)度,P0是入射光強(qiáng)度。
吸光度和透光率之間的關(guān)系:A=?log(T)
其中A代表吸光度,T代表透光率。
這個(gè)公式表明,吸光度和透光率是相反的關(guān)系:吸光度增加,透光率減少;反之亦然。
OD值實(shí)際上就是吸光度的另一種說(shuō)法。在實(shí)際應(yīng)用中,我們通常用吸光度來(lái)表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度,因此OD值等同于吸光度A。
OD600?OD450?OD260/230是什么?為什么用OD600來(lái)檢測(cè)菌的濃度?
OD值后面的數(shù)字,比如OD600或OD450,指的是在測(cè)量時(shí)使用的光的波長(zhǎng),單位是納米。這些波長(zhǎng)的選擇基于不同物質(zhì)對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收特性
OD450:在ELISA實(shí)驗(yàn)中常用,450nm是底物反應(yīng)后產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)。
OD260 / OD280:用來(lái)測(cè)核酸和蛋白濃度,DNA在260nm處吸光強(qiáng),蛋白在280nm處吸光強(qiáng)。
OD600:常用于監(jiān)測(cè)細(xì)菌的生長(zhǎng),如大腸桿菌。這是因?yàn)?00納米的光對(duì)細(xì)菌的散射非常敏感;在微生物實(shí)驗(yàn)中,它是常用的生物量測(cè)定方法之一,能夠間接反映菌液中的細(xì)胞數(shù)量
為什么OD600能夠用來(lái)檢測(cè)菌液濃度,其原理基于以下兩點(diǎn):
①光吸收與散射:菌液中的細(xì)胞會(huì)吸收部分入射光,同時(shí)散射另一部分光。測(cè)得的OD600與細(xì)胞對(duì)光的吸收和散射總量成正比。
②與濃度關(guān)聯(lián):OD600越高,表明菌液中細(xì)胞數(shù)量越多;反之,OD600越低,細(xì)胞數(shù)量越少。
為什么選擇600nm波長(zhǎng)?
①細(xì)胞吸收特性:細(xì)菌細(xì)胞(如大腸桿菌)在600nm波長(zhǎng)處的光吸收能力最強(qiáng)。此波長(zhǎng)與細(xì)菌細(xì)胞的平均尺寸(1-5微米)相匹配,使得光散射和吸收效果最顯著,從而提高了測(cè)量的敏感性。
②避免培養(yǎng)基干擾:常用培養(yǎng)基(如LB培養(yǎng)基)在600nm處的光吸收極低,因此測(cè)得的OD值600主要反映菌體濃度,而非培養(yǎng)基的顏色或成分。
③歷史經(jīng)驗(yàn)校準(zhǔn):科學(xué)家通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),600nm波長(zhǎng)與細(xì)菌濃度的線性關(guān)系最佳。例如,當(dāng)OD600≈1.0時(shí),大腸桿菌的濃度約為1×10? CFU/mL( colony-forming units per milliliter,即每毫升菌落形成單位)。這一發(fā)現(xiàn)使得600nm波長(zhǎng)成為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)量注意事項(xiàng)為確保OD600測(cè)量的準(zhǔn)確性,

需注意以下事項(xiàng):①稀釋菌液:將菌液稀釋至OD值0.2-0.8之間。若OD值過(guò)高(如>1.0),需進(jìn)一步稀釋以避免測(cè)量誤差;若OD值過(guò)低(如<0.1),則可能因信號(hào)太弱而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。②搖勻菌液:測(cè)量前需充分搖勻菌液,以確保細(xì)胞均勻分布。若菌液沉淀,可能導(dǎo)致測(cè)量值偏低。OD值與菌液濃度的關(guān)系正比關(guān)系:OD600與菌液濃度成正比,即OD值越高,菌液濃度越高;反之亦然。但需注意,這種關(guān)系并非嚴(yán)格的線性關(guān)系。
好,今天關(guān)于OD600檢測(cè)菌液濃度
就說(shuō)到這里
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