
外泌體的提取和鑒定及權(quán)威綜述【收藏干貨】
2021-04-25 16:27:50
來源/作者:普拉特澤生物-醫(yī)學(xué)整體課題外包
當(dāng)我們想要對一個(gè)領(lǐng)域有一個(gè)總體概覽的時(shí)候,要get這個(gè)領(lǐng)域的關(guān)鍵信息,最快速的方法就是閱讀這個(gè)領(lǐng)域最權(quán)威、最全面的幾篇綜述了。我們這次特地整理了外泌體領(lǐng)域最重要的幾篇綜述,供各位大大們閱讀參考啦~
外泌體(Exosome)是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu),能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeted delivery system);存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息,不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。

圖1:細(xì)胞釋放外泌體
>>>外泌體不同提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)對比

>>>外泌體的鑒定
1、電子顯微鏡識別外泌體(形態(tài)學(xué))
2、粒徑大?。椒治觯?/span>
3、Western blot 檢測外泌體(標(biāo)志蛋白)
4、流式細(xì)胞儀鑒定(外泌體的表征)
>>>得到了外泌體之后如何做?
外泌體攜帶大量功能性的miRNA,少量的mRNA、lncRNA,以及特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長因子)等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。對外泌體驗(yàn)明正身之后,就可以在蛋白水平和核酸水平對其進(jìn)行檢測和深入分析了。

>>>外泌體領(lǐng)域綜述
推薦4篇相對較早、較全面、權(quán)威的綜述
1、Thery, C., et al. (2002). "Exosomes: composition, biogenesis and function." Nat Rev Immunol 2(8): 569-579. 2017年最新IF=39.416(描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì),總結(jié)了其生物學(xué)效應(yīng),特別是免疫系統(tǒng),討論了分泌囊泡可能作為細(xì)胞間信使的潛在作用。)
2、Raposo, G. and W. Stoorvogel (2013). "Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends." J Cell Biol 200(4): 373-383. 2017年最新IF=8.717(專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制)
3、Yá?ez-Mó, M., et al. (2015). "Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions." J Extracell Vesicles 2017年最新IF尚無(討論各種組織和體液中EVs從細(xì)胞系統(tǒng)到器官的分子內(nèi)容和功能。還回顧了細(xì)菌、低等真核生物和植物中EVs的生理機(jī)制,突出了新興通信系統(tǒng)的功能一致性)
4、Tkach, M. and C. Thery (2016). "Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go." Cell 164(6): 1226-1232. 2017年最新IF=30.41(關(guān)注腫瘤細(xì)胞和微環(huán)境,但類似的結(jié)果和挑戰(zhàn)也適用于EVs介導(dǎo)的其他的病理/生理過程)
推薦4篇具體應(yīng)用的文章思路,一般都用經(jīng)典的ABCD四要素,即A基因通過B基因/信號通路在C疾病中發(fā)揮D功能,那第一篇文章就是這樣的套路:
1、Exosome-Transmitted lncARSR Promotes SunitinibResistance in Renal Cancer by Acting as aCompeting Endogenous RNA(lncARSR通過競爭結(jié)合miR-34和miR-449導(dǎo)致AXL/c-MET的增加進(jìn)而激活STAT3, AKT, and ERK 信號通路促進(jìn)腎癌細(xì)胞對舒尼替尼的耐藥;同時(shí),lncARSR可以被包被至外泌體傳遞至舒尼替尼敏感株,導(dǎo)致敏感株的耐藥(Fig6))
2、Exosomes-mediated transfer of long noncoding RNA ZFAS1 promotes gastric cancer progression(外泌體介導(dǎo)的長鏈非編碼RNA ZFAS1的轉(zhuǎn)移促進(jìn)胃癌進(jìn)展)。
3、Macrophages derived exosomes deliver miR-223 to epithelial ovarian cancer cells to elicit a chemoresistant phenotype(巨噬細(xì)胞衍生的外泌體將miR-223遞送至上皮卵巢癌細(xì)胞以引發(fā)化療耐藥性)
4、3D Cellular Architecture Affects MicroRNA and Protein Cargo of Extracellular Vesicles. (3D細(xì)胞結(jié)構(gòu)影響細(xì)胞外囊泡的microRNA和蛋白質(zhì)成分)
8大外泌體數(shù)據(jù)庫點(diǎn)此跳轉(zhuǎn)